采集精液可用于评价繁殖能力及进行不孕症的检查与进行人工授精。
1.精液采集法
①器械。消毒的物品有用于保持体温的保温器、玻璃或四氟乙烯的漏斗 (8厘米)、玻璃或四氟乙烯制的试管、生理盐水。未消毒的物品有显微镜用的载玻片和盖玻片 (预温)、染色液、福尔马林缓冲液、血球计数器、显微镜和照明装置。
②精液的采集方法。将雄犬和雌犬 (尽可能选择发情中的)静悄悄地放入一室。让雌犬和雄犬戏耍几分钟。为保定雄犬,需由助手用颈环控制雄犬。用手握住雄犬阴茎骨后的包皮,轻柔而紧紧地规则性地施压。雄犬会出现迅速的勃起,腰部用力而开始射精。用漏斗接取精液,注意不要将漏斗壁与阴茎接触。雄犬通常不爬跨普通的雌犬。
精液通常由三部分组成:
尿道分泌物——射精的前50秒内,量为0.1~2毫升,pH值为6.3。
含有精子的分泌物——1~2分钟内,量为0.5~3毫升,pH值为6.1。
前列腺分泌物——30秒钟内,量为2~20毫升,pH值为6.5。
总分泌物量为3~20毫升,pH值为6.4。第一和第三部分为透明的水样液,第二部分为浓而不透明的白色物质。可以更换采集瓶来将这些组分分开。最好的采集办法是使进入精子组分的前列腺液保持在仅能使试管湿润为佳,过多则对保存中的精子有害。
2.精液品质的评价
精液采集后要立即将试管作几次缓慢的倒转,使精液混合。
①检查精子活力。取一滴精液滴于保温的载玻片上,滴一滴生理盐水与之混合。盖上盖玻片后于低倍镜下检查活力。全部精子呈强力运动而无波动运动者为最佳。在高倍镜下检查10个视野,观察活动精子与不活动精子的数量,良好的精液活动精子数目应在80%以上。
②计算精子数量。在血球计数板上进行。因为前列腺液混入的多少不同其数量变动也很大,但对于受精影响大的是一次射精的精子总量。正常犬一次射精的数量应在5亿以上,精子数量需达到2亿以上方能保证受胎率。
③形态学检查。将1滴精液滴于载玻片上,然后加1滴墨汁,并小心混合。将混合物像血液标本一样制推片并干燥。可在高倍镜下观察精子的形态,观察100个精子,区别正常与异常的精子。
当对精子是否异常有疑问时,最好观察500个精子。进一步进行复杂的染色而进行详细的精子头部的检查。用96%的乙醇100毫升溶解10克伊红制成原液,用90%的酚红10毫升加170毫升蒸馏水制成酚红溶液,1克蓝-伊红用96%的乙醇100毫升制成蓝-伊红原液;取伊红过滤后的原液10毫升与100毫升酚红溶液混合,在该混合液100毫升中加入蓝-伊红原液50毫升,静置14天,于使用前过滤 (该溶液可贮藏数个月,但为了防止霉菌发育而最好在冷藏库内贮藏)。
染色方法:用新鲜的精液制涂片,风干或火焰固定。用无水乙醇浸3~4分钟后再干燥,在50%的氯胺中浸至除去粘性成分,蒸馏水洗后放入96%乙醇中,然后用染色液染色8分钟,水洗后干燥。
应用下面的方法检查精子头部以外的部分(中央部和尾部):将1滴精液和1滴福尔马林液混合。将混合液滴于载玻片上,在相差显微镜上检查。这种标本最适于固定,以便于送检和日后观察。
正常犬的精子全长约68微米,头部为7微米。异常精子约为15%,良好的精液则不超过20%。精子部位的异常是重要的,其部位异常的程度应在此比例以下: 头部异常10%~12%,中央部异常3%~4%,尾部异常3%~4%。单侧睾丸内细胞的障碍将导致更严重的结果,进一步检查应进行睾丸的活组织检查。精子离开睾丸后所受的障碍来自于附睾的疾病或寒冷、外伤、渗透压或由尿液所致的污染。发现异常时,则应在数日内检查2~3次精子样本,以查明原因,之后4~6周检查是治愈还是发生了退行性变化。
健康雄犬按计划进行交配,其精子贮藏能力不会减退。其具体计划为隔天1次,始终如此; 或休息2天,持续3天,1天1次; 或休息2天的话,可1天2次。
3.人工授精
①物品。试管内采集的合适的精子(活力80%以上,形态正常占80%以上,数量2亿以上),干燥而灭菌的5~10毫升注射器 (需要保温),塑料制23厘米人工授精用吸管,2厘米长橡胶制管,酒精、脱脂棉。
②人工授精方法。选择授精的最适期非常重要,以是否接近雄犬及阴道细胞涂片镜检来判断。在雌犬举尾允许交配的第二天或阴道细胞检具有发情特征时进行输精。阴道细胞镜检时当再次出现白细胞时则为时已晚。输精要至少间隔48小时输2次。只有在雌犬有性欲时再重复进行。
酒精棉充分擦拭阴门部; 用连接有温注射器的输精用吸管慢慢地吸取精液; 将输精吸管插入阴门,沿阴道背侧向前深入直至子宫颈口。将吸管仔细地伸入子宫,注入精液,直至排出吸管内的全部精液。如果不能将细管插入子宫,则可将精液注入阴道的前部; 拔出吸管,将雌犬的后躯提起4分钟,用戴灭菌手套的手指插入阴道内,用指尖刺激阴道壁的背侧。以引起雌犬的性器官收缩(这种做法非常重要)。最后静静地将雌犬领回犬舍。