自身免疫性溶血性贫血时产生异常的球蛋白，吸附红细胞或在血清中循环。将正常犬的血清、血浆或血浆球蛋白给家兔注射，则家兔产生对犬的这些蛋白质的抗体，抗体进入兔的血清，并加入血液循环。这样制造的兔血清称为抗体血清，这种血清可与犬的红细胞发生反应，只有在异常的球蛋白的表面覆盖时才引起凝集。

直接抗体试验是应用抗犬球蛋白血清和怀疑患自身免疫性溶血性贫血的犬洗净的红细胞相混合，凝集的话，则说明在红细胞上存在抗体。