1.采精

犬的人工采精有手握法、假阴道法和电刺激法3种，目前常用的是手握法。但不论应用哪种方法，为获得可靠的高质量精液，在采精前应确保种犬在前4天内未用于配种或采精，对非种用犬应至少采集3次精液。

宠物医院对公犬而言通常是一个奇怪、甚至是充满敌意的地方，在此环境中采精不但会影响采精的过程，而且会影响精液的质量。如果采精困难，应考虑到宠物主家进行采精，但此时应携带检查精液的器械。

采精前，应检查公犬的外生殖器。此时检查者应戴上手套，接近公犬并通过声音和手势使其熟悉操作者，同时宠物主和助手应握紧犬牵引带。操作者轻轻拍打公犬后，仔细检查睾丸的大小、活动性、光滑性和坚实性。同时询问宠物主是否发现阴囊皮肤增厚或阴囊其他的明显变化;公犬是否有其他可见疾病。检查完阴囊后应感觉阴茎的长度，滑动包皮，以观察阴茎的颜色，有否黏连，有无损伤、疤痕以及表面是否有红点等。同时询问宠物主有关公犬的排尿习惯，近期是否曾有过改变等。

如果外生殖器正常，准备好所需的器械后即可采精，如果有可利用的相同大小任何品种的发情母犬，可在很大程度上帮助采精。如果没有现成的发情母犬，用事先准备好的试情器，这种试情器带有发情母犬阴道的气味。值得说明的是，许多公犬在未站稳前不能很好地交配，特别是老犬更是如此。为保证公、母犬都能站稳，最好使用2米长的胶皮垫。胶皮垫展开后，将母犬牵上，助手位于母犬的右侧保定母犬，如果必要可轻度镇静母犬。助手将一只手伸入母犬胸下，以使其站立，另一只手控制犬头部，应注意防止公犬爬跨时，其阴茎触及助手的手臂而导致爬跨失败。

准备好母犬后，应牵拉公犬的牵引带将其带入室内，注意应禁止公犬排尿，否则，尿液会污染精液。如果公犬已排尿，则用挤压方法将其尿道内残留的尿液排出。如果所用的试情母犬未发情，在牵公犬进室前先解冻试情器，将公犬牵向母犬时，将试情器放在公犬的鼻部前方。

手握法，采精操作者一手握住阴茎球部，并用手掌以脉冲式按压球部刺激公犬射精，另一只手拿连接漏斗并带有刻度玻璃管收集精液。注意防止漏斗触及阴茎的龟头，否则，会引起射精失败。

假阴道法采精，在使用前使假阴道的温度接近体温。首先通过包皮按摩阴茎，当阴茎达40%～50%硬度时，将包皮移到阴茎球后。如果公犬的阴茎过大时将很难使包皮滑过阴茎球。如果这种情况确实发生，应将公犬带离母犬，直到其阴茎变软后再牵回，在阴茎硬度达50%前，把阴茎包皮后移到阴茎球后。此过程对年轻公犬特别重要，因为青年公犬容易兴奋而其包皮鞘口还未发育到最大。

在犬的阴茎变硬并暴露以后，将人工阴道套在阴茎球以上。操作时避免在犬阴茎和假阴道之间有犬毛。操作者的一只手放在公犬两后肢之间，使人工阴道紧围在阴茎球上方，另一只手用于固定采集精液的离心管。射精后对精液进行初步肉眼观察。

犬的精液分段射出，可分段收集。第一部分是尿道小腺体分泌物，不含精子，透明，量为1～2ml (15kg的犬); 第二部分是富含精子的混悬液，颜色为乳白色，量为1～3ml; 第三部分是前列腺分泌物，水样液体，含极少数精子，量为2～4ml。公犬每次的射精方式应是一致的。

采集第三部分精液之后，轻轻地将人工阴道摘下。此时，公犬的阴茎变得非常大，其表面血管极易受损，此时应注意保护，否则，将导致疼痛，感染，继而缺乏性欲。

采精后，将公犬放于检查室内，如果在5分钟之内其阴茎还未开始变小和变软，应牵公犬慢步行走，这种运动常使阴茎回缩到包皮鞘内。如果此法不能使阴茎变软，应用棉花蘸温水轻敷，如果还不能奏效，应将阴茎浸入冷水中，这对那些阴茎相对于体重较大的犬尤其重要。公犬阴茎还未变软时，不应将公犬放于笼内或和其他母犬放一起。

2.精液检查

1) 肉眼检查

应检查精液的量、颜色、浓度、云雾、黏稠度、气味及异物等。正常犬的精液为灰白色或乳白色，自行液化后，呈半透明稍有浑浊的乳白色，黄色说明混有尿液，红色或棕色说明混有血液，患精囊炎时，可呈黄色或脓样。正常精液呈一种特有的腥臭味，该气味是由前列腺产生，如缺乏该气味，可能是前列腺功能受损害。精液刚射出时呈浓稠的胶胨样，5～10分钟便从胶胨状态变为液化状态。若排出的精液黏稠度低，似米汤样，说明精子量少。

2) 显微镜检查

将采集精液的试管放置在试管架上，用封口膜封口，用温巴斯德吸管吸取相当于1滴量的精液放于温热的载玻片上，盖片后镜检精子的运动性。精液中至少应有80%～85%精子的前进速度应为5级 (前进速度定为5级)。

0级： 无活动精子，加温后仍不活动，即死精。

Ⅰ级： 活动力不强，精子运动迟缓，原地打转或摆动。

Ⅱ级： 活动力尚可，慢速移动，方向不定，不呈直线运动。

Ⅲ级： 为中速运动。

Ⅳ级： 为快速直线运动，精子很快通过显微镜的视野，对这种最早观察到的精子运动性做详细记录。

检查精细胞的形态时，应将1g曙红和5g苯胺加入含30%柠檬酸的蒸馏水溶液配制成的曙红一苯胺中染色。检查精子畸形率方法为，至少在视野内数100个精子，计算畸形精子所占的百分数。如果能明显识别异常精子时，可以确定; 如怀疑异常时，应和正常的精子比较或检查载玻片的不同视野，以确定最终结果。如在相同的精细胞上出现两种不同的异常，说明精子严重异常。常见的畸形有以下几种形式。

①精子先天畸形： 此种畸形反映了精子生成过程的紊乱。先天性畸形包括头部畸形，如巨型头 (特大精子)、瘦小型头 (微型精子)、锥型头、顶体异常和双头精子。

②中部畸形： 如偏中心连接、双中部、卷中部和弯曲中部。

③尾部异常： 如高度卷曲的尾部和双尾精子等。

④精子后天畸形： 这种形式的异常是在精子生成后离开精细管后发生的，其原因与过度使用或附睾功能障碍使精子迅速经过附睾有关。有时在采集精液过程中尿污染精液，使精液暴露于化学物质中，以及粗暴的机械操作过程都能产生一些异常形状的精子。

精子后天畸形包括顶体分离，精子中部或尾部出现原生质小滴 (说明精细胞未成熟)，头部分离，尾部和中部弯曲，如果同时带有原生质小滴，则说明精子受到了不利的环境影响。

⑤其他异常： 精液中出现异常数量的精细胞和精母细胞，表明睾丸的功能失常; 白细胞的数量增加，表明生殖道某个部位的急性感染; 红细胞数增多表明生殖器的损伤，也包括阴茎和包皮表面的损伤。

所有宠物精液都存在某种程度的异常。已知一个繁殖力正常的宠物，初期精子畸形率可达10%。大家公认畸形精子的发生率不超过20%～30%时是正常的。

记录精子数前，将装有精液样品的试管翻转几次后，用吸头吸取精液，滴一滴于载玻片上，染色后镜下用血细胞器记录精子数。一个有繁殖力的犬其精子数应在0.3×109～2.0×109范围内。一个中等大小的犬，其精子数低于0.3×109时其繁殖力值得怀疑。为获得可靠的结果，如果公犬在两个多月内未曾配种，应在10天内3次采精并做检查。如果精子计数正常，但精子活动力不强，应考虑采精时的技术问题，并重新采样检查。

3) 其他检查

包括亚甲蓝还原试验、pH测定、生存能力试验、精液的细菌检查等。

3.精液的保存

采集的精液往往不立即使用，可将装有精液的试管放入35℃温水中，保存24小时。如果用蛋黄缓冲液稀释 (比例为1∶10～1∶20)，应加入抗生素。如此处理的精液在4℃环境中保存4～5天，精子仍具有活力，如果需要更长时间的保存，则需冷冻保存。

4.犬精液冷冻保护液

目前较常用的是三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸钠-果糖-卵黄-甘油液。其次是三羟甲基氨基甲烷-柠檬酸钠-葡萄糖-卵黄-甘油液、三羟甲基氨基甲烃-柠檬酸钠-氯化钠-肌醇-甘氨酸-蛋白胨-卵黄-甘油液、三羟甲基氨基甲烷-卵黄-甘油液和卵黄-乳酸液等。

5.冷冻方法

有细管和颗粒冷冻法。细管冷冻法又分为逐步降温法和一步降温法。逐步降温法是将精液与冷冻保护液以1∶1或1∶2比例稀释，在5℃平衡4小时，然后以-5℃/秒的速度从5℃降至-15℃，再以20℃/秒速度从-15℃降至-100℃，将细管直接投入液氮中保存。一步降温法是精液稀释后，在4℃平衡2小时将精液移装到细管中，在-196℃液氮中冷冻7分钟，或在0～5℃平衡4小时，分装在0.5ml塑料细管中，在-110～140℃冷冻8～10分钟，贮存于液氮中。

颗粒冷冻法是将精液稀释后，在4℃平衡1.5～2小时，液氮滴冻成颗粒，并冷冻2～4分钟后，浸入液氮中保存。

6.冷冻精液的解冻

方法有35℃水浴干解冻，50℃快速解冻，37℃温解冻，70℃热解冻和40℃温水解冻法。目前以37～40℃的干解冻法应用较多。