一、研究内容

宠物犬寄生虫流行区系调查研究和散养犬寄生虫流行区系调查研究，具体内容包括寄生虫感染种类、感染率、感染强度、地理分布等，在统计感染率和感染强度的基础上确定优势虫种。

感染强度：感染某种寄生虫数量的多少，用最少数量与最多数量区间表示。

平均感染强度：感染某种寄生虫的平均数量。

优势虫种：感染率最高和感染强度最大的寄生虫，有时也可以直接把感染率最高的寄生虫确定为优势虫种。

二、研究方法

(一)调查区域的划分

根据辽宁省的地理、气候及畜禽分布特点将全省划分为辽南(大连、营口、鞍山)、辽北(铁岭)、辽西(锦州、阜新、朝阳、盘锦、葫芦岛)、辽东(丹东、本溪、抚顺)、辽中(沈阳、辽阳)5个区域。

(二)调查样本的确定

1.宠物犬 每个区域内随机抽取5个宠物诊所，每个宠物诊所随机抽检8只宠物犬，对其进行临床检查并采集其新鲜粪便，全省共抽检宠物犬200只。

2.散养犬 每个区域内随机抽取5个自然村，每个自然村随机抽检4只散养犬，全省共抽检散养犬100只。

(三)寄生虫检查方法

对宠物犬进行现场临床检查后逐一编号，采集其新鲜粪便，采用粪便检查虫卵的方法进行检查，对散养犬则采用全省性寄生虫学检查法检查。

1.粪便虫卵检查方法

(1)粪便样品的采集：要采集新鲜而且未被污染的粪便。也可采取直肠内采粪，如果采集排到外界的粪便，要采取粪堆上面没有粘连杂物的部分，采集的粪便要装入洁净的容器中，于数小时内进行检查。

采样时为求代表性，要同时采取粪便的内外各层。如果粪便不能当日检查，应放在冰箱内或阴冷处保存，以抑制虫卵或幼虫的发育和防止粪便发酵。如不能马上检查，则可将粪样浸入5%～10%的福尔马林中，将虫卵固定，使其失去活力。

(2)饱和盐水漂浮法：本法的原理是利用比重比虫卵大的溶液稀释粪便，以把粪便中的虫卵浮集于液体表面，本法常用于比重较小的线虫卵和绦虫卵的检查。饱和盐水的配制：在1000ml水中加入380g精盐，用沸水溶解后，用纱布滤过备用。

操作过程：

①取粪便5g置于烧杯中，加入少量的饱和盐水，用玻璃棒将粪便充分捣碎并混匀，用力要轻，以免将烧杯捣碎。再加入饱和盐水至烧杯的2/3处。

②将混匀的粪溶液用40～60目的铜筛过滤至另一烧杯中。

③将滤液静置20～30min，待虫卵上浮。

④用吊环(金属吊圈)在杯中液面平行轻轻吊取表面液膜，将液膜抖落于载玻片上，反复2～3次，加盖片在低倍镜下检查。

(3)沉淀法：为了检查一些比重较大的虫卵或卵囊，通常应用水洗沉淀法。对粪便用清水反复洗涤和静置沉淀后，可洗去粪内可溶性色素和其他杂质，同时使虫卵沉浮于底部，在沉渣中较易检出虫卵。

操作过程：

①取粪便2g置于烧杯中，并加入少量清水，用玻璃棒将粪便充分捣碎并混匀，再加入清水至烧杯的2/3处。

②将混匀的粪水用40～60目的铜筛过滤到另一烧杯中静置。

③滤液静置30～40min后，慢慢倾去上层液，保留沉渣，重新加水混匀并静置。如此反复多次，直至上层液透明为止。

④缓慢倾去上层液，用吸管吸取沉渣，滴于载玻片上，加盖片在低倍镜下检查。

对宠物犬，每只宠物犬采集新鲜粪便10克，逐一编号后，能当天检查的尽量当天检查，不能当天检查的粪便保存于4℃的冰箱中待检。采用饱和盐水漂浮法和水洗沉淀法，漂浮法每头份粪样检查3张载玻片，每张载玻片用铁丝圈勾取3次液膜涂片，取3次检查平均数。具体判定标准为：同一种卵囊1～3个为“+”，4～7个为“++”，8～12个为“+++”，12个及12个以上为“#”。沉淀法也检查3张载玻片，每张载玻片用吸管吸取一次沉淀物涂片，其判定标准同上，在显微镜下鉴定卵囊的种类并统计感染率和感染强度。

对通过虫卵不能鉴定的虫体，将粪便中虫卵进行培养后采用贝尔曼氏幼虫分离法收集幼虫，通过鉴定幼虫确定其种类，具体判定标准同虫卵鉴定标准。

(4)粪便虫卵培养法

寄生于犬消化道内的线虫，一部分线虫虫卵有明显的特征，而有的线虫虫卵在大小和外形上都十分相似，很难区别。为了区别这些线虫的种类，做出正确的诊断，常将含有虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育为幼虫(感染期幼虫)时，再检查幼虫，根据幼虫的特点，加以鉴别。

在培养皿底部加草纸或滤纸一张，然后在另一个培养皿中将要培养的粪便加水调成硬糊状，塑成半球形，放入皿中的草纸或滤纸上，并使半球形粪便的顶部略高出平皿边沿，以保证加盖时能与盖相接触。加盖后将其放入25℃的温箱中，注意保持平皿内的湿度(应使底部的垫纸保持潮湿状态)。经7d后，多数虫卵都可以发育第三期幼虫，并集中在平皿盖上的水滴中。便可以将幼虫取出放在载玻片上镜检。

(5)幼虫检查法

漏斗幼虫分离法：又叫贝尔曼法。取粪便15～20g，放在漏斗内的铜纱网上，漏斗下接一短橡皮管，管下再加一小试管，此装置叫做贝尔曼氏装置。

将粪便放在漏斗内的铜纱网上，不必捣碎，用40℃的温水加满试管和漏斗(淹没粪球为止)，静置1～3h。使幼虫游进水中，并沉于试管底部。然后取下试管，弃去上层液，吸取底部沉渣于载玻片上镜检。

用以上方法，可见到运动活泼的幼虫，如果要做详细的观察，可向有幼虫的载片上滴加卢戈氏碘液，使虫体很快死亡，变为棕黄色，在镜下详细观察并进行分类。

2.对散养犬采用全身性蠕虫学剖检法

同猪体内蠕虫学检查法。

3.对蜘蛛昆虫等体外寄生虫的检查

通过现场临诊检查，对螨虫发现病变后直接刮取病料，在实验室用消化法处理后，直接在显微镜下检查，确定其种类，通过症状和病变确定其感染率;对虱子、蜱等寄生虫，直接摘取虫体，在实验室电解剖镜和普通显微镜下鉴定其种类，通过症状和病变确定其感染率，最后根据感染率、感染强度情况确定优势虫种。

4.对体内原虫的检查

(1)对犬球虫的检查 同猪球虫检查方法。

(2)对犬焦虫的检查 同牛羊焦虫检查方法。

三、研究结果

(一)宠物犬寄生虫流行区系研究结果

1.此次调查共发现辽宁省宠物犬体内外寄生虫19种，分别隶属于6纲15科18属，详见表8。

表8 辽宁省宠物犬寄生虫流行区系调查研究结果