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(十)雌犬繁殖的检查和诊断方法
书籍:新编犬猫疾病诊疗图谱    来源:辈宠网

病史

特征描述 应该记录雌犬的品种、年龄、体重和发情史。小型品种犬的发情频率高于较大型的品种犬。根据报道,进入初情期的平均年龄为9.6~13.9个月,但最晚可以达到23个月。青春期发情和初情期很少伴有外部表现,而且可能不会导致排卵。如果没有雄性犬的话,很难发现雌犬的第一次发情。

雌猫发育到青春期时体重达到2.3~2.5kg,而此时正好是进入猫的第一个交配季节,这个季节的白天(或日照时间)相对较长。

犬舍/猫舍的管理 应该注意猫的大致健康状况、日粮和组群的活动并进行统计(表5.39)。

疾病控制和预防、常规驱虫和免疫、心丝虫预防方案,连同卫生和清洁程序,隔离系统,不让外来动物进入犬舍/猫舍,以及生育雌畜/幼畜的管理等都要进行记录。有关以前繁殖参数的相关信息,有助于临床医生区别是个体原因还是群体原因(表5.40)。

另外,还有一些需要对生育雌猫特别注意的问题,包括居住方式、与其他雄猫和雌猫的群居化程度以及光照周期。

系统健康 根据雌犬和雌猫所处发情周期不同阶段的具体情况定量计算其日粮需要。注意添加剂和相对水平,公布少数几个符合雌性动物最佳营养搭配的重要数据,但是应该对饲料添加剂(尤其是作为繁殖力增强剂的添加剂)进行严格检查,因为没有任何饲料添加剂能够对正常的犬、猫起到这种作用。以前或现存的全身或局部疾病可能会对生殖道或控制生殖功能的内分泌轴产生直接或间接的影响。虽然药物对生殖功能的效果还没有被很好的证明,但有些化学药品,包括类固醇、抗有丝分裂药物和某些抗生素确实会对发情周期的循环性、受精能力和胎儿发育产生不利的影响。呕吐、多饮多尿、皮肤和被毛异常、肥胖和消瘦、活动习惯改变和耐寒能力下降可能是内分泌疾病的先兆,应该予以关注。

发情史 虽然青年和老龄雌犬的发情规律会有所改变,但如果一只成年雌犬的发情间隔突然延长或缩短则说明该犬可能出现了内分泌异常。如果可能的话,第一次发情的年龄、发情期和发情间期的平均频率,以及发情期间隔都应该予以记录。明显的假孕可以被解释为雌犬和雌猫的正常现象,而且可以说明上次发情期发生了排卵。对以前的诊断结果有助于配种管理的内容进行记录,其中包括外阴的形态学变化、阴道分泌物的性质、阴道细胞学检查、阴道内镜和孕酮检测。上述这些检查的结果可以提供有关周期性和排卵的明显信息。给予任何外源性类固醇,包括合成代谢或抑制发情或排卵的药物都会影响到随后的繁殖功能。

表5.39 犬舍/猫舍的统计学参数

表5.40 生殖表现的参数

配种史 仔细研究以前发情史,决定开始配种的理论为依据。根据开始出现临床症状的时间(以天计算),还是看雌犬接纳雄犬的敏感性,或者是阴道细胞学检查或孕酮检测的结果。犬的精子可以在雌犬的生殖道内存活5天甚至更长的时间,因此在发情前期临近结束直到发情期结束配种才会导致妊娠。尽管如此,导致雌犬妊娠失败的最常见的原因是因管理不善导致的配种时间错误。

图5.102中概括了雌犬正常发情周期中的一些临床和内分泌变化。外阴的形态学改变和阴道分泌物有助于判断雌犬的发情,但并不是十分可靠(图5.103和图5.104)。有些雌犬可能是在发情前期的后段接受交配,而另外一些特别是初次发情的犬和在群居中占统治地位的雌犬,则可能整个发情期都不接受雄犬的交配。如果能够连续进行阴道细胞学检查可以提供非常有用的信息。角质化指数是指细胞学检查时表面上皮细胞和无核上皮细胞的比值(图5.102,典型的细胞学变化图5.105~图5.108)。阴道上皮细胞不断角质化过程终止的时间,大致相当于雌犬开始接受交配的时间。从此时开始直到发情间期阴道细胞学不会再有任何变化。因此,单纯的细胞学检查对确定配种时间是没有意义的。检测孕酮水平以预测排卵前的LH峰是确定配种时间最可靠的方法。

雌猫在整个配种季节内有多个卵泡期或发情期,发情期间歇期是每个卵泡期之间间隔的阶段。只有在交配后猫才会进入发情间期或假孕期(表5.41)。

虽然只要有一次适时的交配就可以导致怀孕并保证一定的窝产仔数,但进行重复配种后似乎更让人放心。因为犬的精液在雌犬生殖道内的存活时间很长,不必要更频繁的交配,所以再次配种的时间可以间隔2天以上。在雌犬预定可接受发情期的7~9天内,间隔2~3天,进行3次配种,笔者认为这是保证受孕的最佳选择。决定何时停止配种也同样重要。突然拒绝交配和阴道细胞学的显著变化,明确显示动物开始进入发情间期。在停止交配未确定时,连续几天进行测定。

图5.102 这种曲线图表现了雌犬发情期和发情前期一些重要的内分泌和临床变化。激素值——雌二醇(E2)、孕酮(P4)、黄体激素(LH)和角质化指数(CI)是以它们占最大值的百分数来表示的。X轴表示的是距离LH峰的天数。

图5.103 雌犬发情时的外阴比较形态学。发情前期雌犬的外阴在雌激素作用下肿胀。

图5.104 外阴仍然膨大肿胀,但已松弛——LH峰即将来临或正处于LH峰时的变化。

图5.105 发情前期早期的副基细胞(长箭头指示)、中间细胞(三角指示)和大量红细胞。

记录犬球状腺出现的持续时间以及是否属于球状腺外翻(膨胀的球状腺突出于阴道穹隆外)。如果出现球状腺外翻则说明雌犬的前庭或阴道存在狭窄。因为解剖学结构正常时,膨胀的球状腺应该在阴道穹隆内,因此可以推断球状腺外翻的雌犬受精能力会有所降低,但这种假定还没有得到证实。球状腺的持续时间与不孕没有联系。一般认为球状腺出现10~50分钟是正常的,而1~3分钟的短暂交配说明出现了不完全射精。

对于雌猫,宠物医生应记录它是否接受雄猫的交配以及是否以前怀孕,如果是这样,是和哪只雄猫交配后怀孕的。

如果以前采用的是人工授精,则应该对这项技术进行研究并记录每次配种所用精液的活动精子数。同样,如果使用冷冻精液,还应该考虑动物的受精类型(阴道射精型和子宫射精型),冷冻、解冻和操作程序以及受精时间等。冷冻后再解冻的精液穿过子宫颈的能力下降,而且只能存活12~24小时。

妊娠和泌乳 以前的窝数和窝产仔数,死胎、木乃伊胎、体质虚弱的幼仔或流产的数量以及幼仔的任何疾病都应该有所记录。如果雌犬或雌猫被诊断已经妊娠但却没有产下胎儿,记录妊娠诊断的方法和时间。如果这期间出现任何临床症状,可以认为其与妊娠损失有关。记录流产的胎儿和阴道分泌物的情况以及任何诊断病理学结果。

个体的生殖参数 个体参数可以记录每只雌犬的配种效率,大多数与群体参数类似。其中最能综合体现雌犬生育力的是每个配种周期的活产仔数。

体检

一般检查 全身疾病和非生殖器官的原发性疾病可能会影响动物的生殖表现。肾上腺皮质功能亢进、甲状腺功能低下、垂体的肿瘤、肾上腺肿瘤和严重的消耗性疾病(包括寄生虫感染和癌旁综合征)都会严重影响生殖系统的功能。原发性生殖道障碍,如子宫积脓也可以导致其他器官或全身性的疾病。已经证明有些传染性因素在妨碍生殖道功能的同时还会引起其他很多器官的病变,如犬疱疹病毒。由于以上这些原因,应该对所有不孕动物进行体检,其中包括对乳腺的异常肿大和分泌物的检查。

非介入性检查 相对于介入性检查而言,应优先考虑对后生殖道进行非介入性检查。检查外阴的大小、膨胀度、构造、完整性,以及有无囊泡和分泌物,这些结果都可以提供一定信息,有助于判断动物所处的发情阶段,是否患有阴道炎、子宫积脓、阴道异物和占位性病变。阴蒂在大量性激素或其同功异质体的作用下呈肿胀状态,如给灵 雌犬睾酮以推迟发情。具有分泌活性的肿瘤产生的内源性激素会导致一些异常。偶尔可见骨性阴蒂或有些中性犬的阴蒂呈阴茎样外观。

阴道指检 雌猫无法进行阴道指检。正常的诊断程序应该是先通过视诊观察、然后进行阴道指检,仍无法确诊时再借助仪器和诊断工具对后段阴道进行检查。但如果想要从后段阴道内取出无污染的培养物则属于例外的情况。指检的范围应包括检查外阴、前庭、前庭阴道结合部和前后段阴道,以确定其黏膜的完整性和子宫颈的开放程度(表明所处的发情阶段)。另外,还应检查外阴和阴道有无狭窄、粘连、占位性病变和异物,或确保子宫颈口在配种或人工授精前处于开放状态。

通过直肠指检 通过直肠指检可检查到雌犬位于盆腔边缘的生殖道。如果想把这项检查应用于猫则必须对待检动物施行镇静。彻底清洁手指,插入手指摸到耻骨前缘。子宫颈位于直肠腹侧,可将其作为一个标志,以便定位后段管状生殖道和检查子宫体。用拇指或另一只手的手指通过腹腔进行触诊,也可以用两只手的指尖完成检查。一般从位于直肠腹侧、膀胱背侧的子宫颈或子宫体开始触诊,然后向前摸到子宫角。除非卵巢肿胀非常大,否则一般无法摸到卵巢。用一只手的食指通过直肠进行检查,而另一只手通过腹腔进行触诊可以准确地定位后段生殖道。直肠和腹腔触诊或二者相结合,可以了解阴道、子宫颈、子宫体和子宫角大小、连续性和质度的情况,还可以确定是否有液体、胎儿或气体存在而导致子宫的扩张。

临床病理学 完整的血象、尿分析和血清生化指标的检测可作为原发病(特别是会影响生殖功能,但却没有明显症状的肾脏、肝脏和内分泌疾病)的诊断标准。例如,性激素是在肝脏进行代谢的,因此肝脏有疾患时会明显延长激素的循环周期。

[阴道细胞学]

技术 任何仪器的通路都应该符合以下条件:仪器和诊断工具必须进行消毒灭菌;对会阴进行清洗并适当晾干。先处理设备通路,然后再进行阴道检查,当然做阴道微生物培养的情况除外。可以将润滑剂涂在仪器上,然后从外阴的背缝处插入,靠近前庭和阴道的背侧面向内延伸。这样可以避免对阴蒂的不慎刺激,而且不会受到阴蒂窝和尿道口的干扰(图5.109)。或者也可以选择使用阴道张开器来避免这些解剖结构的影响。在前庭阴道结合处可能会遇到一些轻微的阻力。可以用一个生理盐水湿润的棉拭子在阴道前段采集用于细胞学检查的阴道细胞样本,然后将样本置于载玻片上,用新亚甲蓝、瑞氏-吉姆萨染色液和三色染色液进行染色。

发情阶段 连续采集剥落的阴道黏膜细胞样本将会有助于鉴定雌犬或雌猫所处的发情阶段(图5.105~图5.108)。

细胞学诊断 细胞学检查可以为阴道炎、阴道肿瘤以及子宫颈开放的子宫疾病(阴道有分泌物,如产后子宫炎、胎盘附着点复旧不全、囊性子宫内膜过度增生和子宫积脓)等疾病的诊断提供有力依据。

● 患有阴道炎的雌犬和雌猫阴道涂片上除了有上皮细胞外,还含有嗜中性细胞和红细胞。嗜中性细胞的形态可能是正常的,也可能有变性的白细胞,而且通常含有胞内细菌。慢性阴道炎的病例偶尔可见巨噬细胞和淋巴细胞。处于发情前期或发情间期的雌犬和雌猫阴道细胞学的表现与阴道炎时很相似,但正常时涂片中不会持续出现嗜中性细胞。

● 在阴道细胞学涂片上可以看到阴道肿瘤,如纤维乳头状瘤(息肉)、平滑肌瘤以及可以传染的性肿瘤的脱落细胞。阴道可能是肿瘤继发侵害的位置。如,移行细胞肿瘤最初是在尿道内生长,但偶尔也会蔓延至阴道。

表5.41 雌猫每次卵泡期后的可能性*

注:*共有三种可能性:回到卵泡期、进入发情间期(假孕)或妊娠期

图5.106 发情前期中期——上皮细胞的核染色质浓缩,细胞质与核的比例增加,边缘出现棱角。

图5.107 发情期——只有表面上皮细胞和无核上皮细胞:背景上有细胞碎屑。

图5.108 发情间期——注意非角质化细胞的突然再现以及大量嗜中性细胞浸润。

图5.109 雌犬后部前庭演示阴唇(切开和钳子夹住的部位)、阴蒂窝(腹侧的回缩部位)和尿道口(插导管的位置)。

● 开放型子宫积脓的雌犬会从子宫颈流出分泌物。出现变性嗜中性细胞和阴道上皮细胞,偶尔可见空泡状的子宫内膜细胞。上皮细胞可能出现畸形,边缘不清。有些可以发现细菌,但不是每个病例都会出现这种情况。

● 产后雌犬会在一段时间内(不超过3周)排出恶露。细胞学检查发现阴道上皮细胞、子宫内膜细胞和大量黏液中有红细胞和嗜中性白细胞。

● 犬带状胎盘边缘血肿的代谢产物——子宫绿素(图5.110和图5.111),从胎盘开始剥离起可能随时会出现并会把阴道分泌物染成绿色。

图5.110和图5.111 胎儿(图5.110)和雌犬怀孕晚期的子宫(图5.111)显示带状胎盘和绿色的边缘血肿—子宫绿素的来源。

● 产后子宫炎时可能出现所有上述的细胞类型(特别是嗜中性细胞和细菌),此外,当刺激因素是残存的胎儿时,细胞学检查偶尔还会发现肌纤维。

● 胎盘附着点复旧不全是一种以持久性滋养层细胞(即滋养层细胞继续在子宫黏膜内生长)为特征的产后疾病。雌犬没有其他症状,但阴道持续有红色分泌物,其中一般包括红细胞,偶尔有嗜中性细胞,还可能发现特征性的滋养层细胞。

阴道微生物培养 采集培养物的工作应在所有介入性操作之前完成。需氧培养的样本应由带有防护装置的培养人员从阴道前段获取。有大量证据表明,能够正常生育的雌犬生殖道黏膜上有细菌建群,而且这些细菌中包括很多机会致病菌。根据雌犬的品种和所处发情阶段不同,细菌的数量和种类差异也很大,其中包括多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、支原体属和β-溶血链球菌。这些微生物可能混杂生长,也可能恢复单一菌种。除了颈口开放的子宫疾病(如开放型子宫积脓)以外,没有任何证据显示阴道微生物培养结果能够代表子宫内的情况。在配种前进行阴道微生物培养没有任何意义。可以把阴道微生物培养列为生育雌犬的常规检查项目之一。尽管有时也需要进行支原体或脲原体的培养,但一般情况下只按照需氧菌培养操作就足够了。直接平皿接种适用于定量分析微生物的性质,如不能马上接种则需转运培养基。

阴道镜检查 生殖道的检查可以分两个阶段来完成。首先用一个鸭嘴形的张开器检查阴蒂、阴蒂窝和前庭,然后完成阴道镜的检查,清醒的犬取站立位,镇静的犬取俯卧位。阴道镜必须足够长以保证其能够探查到前部阴道远端。灵 雌犬阴道的长度为15~25cm。儿科直肠镜、易弯曲(或不易弯曲)的内镜都比较适合用于雌犬的阴道镜检查。而猫的阴道可以用小号易弯曲的内镜或检耳镜来检查。如果能够吹进一些空气或灭菌生理盐水以扩张前段阴道可以使操作更加简便。一般来说,将内镜进行润滑后直接插至前段阴道检查其内部结构,检查完毕后抽出内镜即可。但临床医生应该意识到内镜的插入会导致通路的黏膜下出血。随着阴道镜的抽出,可以在子宫颈后背正中线的位置看到一个皱褶,正是这个皱褶向下延伸,占据了子宫腔的部分空间而形成了子宫颈。由于前段阴道腔被这个皱褶阻塞,因此看不到子宫颈。而从解剖学的角度看,子宫颈从阴道下方呈45°角的方向开口于向腹部阴道穹隆的腹侧。阴道镜检查可以用于评价黏膜的完整性;确定雌犬所处发情阶段(表5.42);检查阴道肿物、病变和异常;采集活组织检查和培养物标本;以及确定阴道分泌物的来源。

超声波检查 实施超声波检查时雌犬取仰卧位或站立位。子宫位于膀胱的背侧,卵巢位于肾的后侧。卵巢的情况(如出现卵泡或黄体)和子宫结构的典型变化可以帮助临床医生判断生殖道疾病(图5.112和图5.113)。诊断和预后要根据囊性子宫内膜过度增生、子宫积脓(图5.114和图5.115)、产后子宫炎、胎盘附着点复旧不全、卵巢或卵巢冠组织的囊肿、卵巢肿瘤或正常周期性因素来综合判断(表5.43)。

表5.42 阴道内镜检查外观*

注:*阴道黏膜皱褶的外观与雌犬所处的发情阶段有关。

表5.43 妊娠时生殖道正常结构的变化

图5.112和图5.113 雌犬典型的发情期(双侧)(图5.112)和发情间期后期(单侧)(图5.113)生殖道。注意卵巢上有卵泡,而且发情期的子宫肿胀、卷曲。而发情间期后期卵巢上有成熟的黄体,子宫不再卷曲。

图5.114和图5.115 子宫积脓雌犬的子宫,横超声波图显示子宫腔内有液体蓄积。

放射学检查 放射学检查有助于监测妊娠后期的疾病,也可用于鉴别雌性生殖道的占位性病变,这些病变会使受影响的器官体积增大或占据其他腹腔器官的位置。闭锁型子宫积脓就是一个很好的例子。造影很少能确定阴道异常和肿物的程度。

阴道造影和子宫造影 阴道造影和子宫造影是用造影剂填充阴道或子宫。注意子宫壁的厚度、子宫腔的长和宽以及子宫卷曲的程度(图5.116)。

甲状腺功能检测 甲状腺激素对犬生殖道的作用还不完全清楚。甲状腺功能减退一直被误认为是导致不孕的原因,实际上是由许多其他因素造成的。临床医生在解释检测结果时应该谨慎。建立甲状腺功能减退和临床不孕症之间的因果关系有一定困难。循环血液中的甲状腺素(T4)和三碘甲状腺氨酸(T3)缺乏可能是由下丘脑和垂体的异常造成的,但大多数病例的问题根源则是在甲状腺。传统上认为,T4的基础水平比T3浓度更能体现甲状腺的功能,然而,有许多甲状腺功能正常的犬因为其他一些因素造成T4水平降低而被误诊为甲状腺功能减退。这些因素包括犬的年龄和品种、每小时的正常波动、肥胖、饥饿、并发症或药物、类固醇、发情、妊娠和抗甲状腺抗体。T的基础水平低和对应的临床症状只能说明需要进行进一步的检查,而不能就此作出诊断。

内分泌检测 下丘脑释放的促性腺激素释放激素(GnRH)调控着雌犬的生殖功能。促性腺激素释放激素可以刺激垂体前叶激素(FSH和LH)的释放,控制卵泡的再生、发育和排卵。雌激素和孕酮分别是由发育的卵泡和黄体产生的。虽然经常有滥用激素的情况,但外周血液中的激素水平确实能够反映生殖功能的障碍。生殖激素的分泌是脉波式的,因此仅仅检测一次的结果没有太大价值。根据脉波的频率、时间和幅度反复检测,或进行刺激试验获得最大释放浓度后进行检测的报道更为多见。

在雌犬发情前期临近结束时(雌猫接受交配后)孕酮的水平会持续升高2个月,直到下次排卵。孕酮水平不能用于鉴别雌犬或雌猫的发情间期和妊娠。孕酮水平升高暗示有功能性黄体存在,因此动物通常有正常的LH峰和排卵。在发情前期的后期和发情间期(或妊娠)的后期,外周血液中的雌二醇水平都会升高。患有卵巢囊肿或卵泡细胞瘤的动物也会出现雌二醇的升高。雌犬处于发情前期和发情期时睾酮水平也会有所升高(表5.44)。某些中型犬的激素水平也会升高。松弛素从妊娠中期开始升高,具有特异性。

图5.116 绝育雌犬的阴道造影显示扩张的阴道和残留子宫的盲端(箭头所指)。

图5.117 对不孕雌猫进行手术探查发现子宫粘连,子宫腔内有液体蓄积。

图5.118 子宫活组织检查的显微照片显示黏膜下有炎性细胞浸润(箭头所指)。

手术探查 可以通过学习相关知识来尽量减少手术本身对动物造成的损害。将动物全身麻醉后,从腹中线剖开腹腔,轻轻将子宫提至切口处并与腹腔隔离。检查子宫的长度以确定有无异常。可能存在的解剖学异常包括子宫腔部分或全部缺失。可能存在程度明显不同的中性体质。检查卵巢和被膜有无异常。卵巢通常位于卵巢囊内,卵巢囊是输卵管系膜(附着在卵巢上的腹膜皱褶)的延长部分。很容易将卵巢分离出来,但这样有可能会妨碍视线。因为卵巢囊紧紧地附着在输卵管伞部,操作时一定要格外小心。但是也可以通过大体检查来确定卵巢的状态。卵巢内部或周围有时会出现一些囊性结构,但这并不意味着一定会导致动物的不孕。完成大体检查后(图5.117),在双侧子宫角远离子宫系膜的边缘各做一个小切口,以便采集用于子宫内容物培养、细胞学检查和内膜活组织检查(图5.118)的样本。

有人提出可以用生理盐水或染剂从每侧子宫角的顶端向同侧输卵管逆行冲洗的方法使其开放。根据笔者的经验,子宫输卵管结合部在发情期的任何阶段都可以阻止液体逆行流入输卵管。这一操作过程充满了潜在的危险,而且得到的结果也不具有说服力。随着操作和采样技术的进步,在不久的将来,腹腔镜检查将会被更广泛地用于不孕症的诊断。

染色体组型分析 通过检查外周淋巴细胞来确定是否存在染色体异常适用于各种疑似动物。人们曾经报道过表型雌犬性染色体的各种异常,包括XO、XXX、XX/XY、XY。这些雌犬可能不发情或发情周期不规律,外阴很小、阴蒂肿大或长有性质不明的外生殖器。可以把染色体分析和内(或外)生殖器解剖学异常的检查结果相结合,如果有必要还可参考性腺活组织检查的结果从而作出最终的诊断。

表5.44 正常雌犬外周血液中生殖激素浓度

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