第四节 鸡马立克氏病

鸡马立克氏病是由马立克氏病病毒引起鸡的一种高度接触传染的淋巴组织增生性肿瘤疾病，以各种内脏器官、外周神经、性腺、虹膜、肌肉和皮肤单独或多发的淋巴样细胞浸润，形成淋巴肿瘤为特征。本病不仅因其造成严重的经济损失而受到兽医界的广泛重视，而且可作为研究肿瘤发生、发展和免疫的重要动物模型，是世界上第一个能用疫苗预防的肿瘤病，也受到了医学界的关注。该病现已成为世界养鸡业的主要疾病之一，对蛋鸡、种鸡和肉鸡生产均构成极大威胁，OIE将本病列为B类动物疫病，我国把其列为二类动物疫病。

1907年匈牙利学者马立克氏 (Marek’s) 首先报道了该病，当时称之为 “鸡麻痹”，以后很多学者相继报道了此病，但由于其病原未能弄清，故一直把本病与淋巴白血病等相混淆。随着病原体的分离鉴定，最终才确定它们是由不同病毒引起的不同疾病。1961年Biggs等人提议用“马立克氏病”这一名称来区分本病与其他病原引起的淋巴组织增生性疾病。我国从20世纪70年代中期开始先后建立了大、中型机械化或半机械化养鸡场，在此期间因从国外引种和各地种苗的频繁转运，使得MD在国内广为传播。现在，虽然广泛采用疫苗来控制该病，但免疫失败却时有发生。

【病原学】 马立克氏病病毒 (MDV) 属于疱疹病毒科 (Herpesviridae)，α-疱疹病毒亚科的马立克氏病毒属 (Marek’s disease virus) 禽疱疹病毒2型 (Gallid herpesvirus 2)。病毒的裸体粒子或核衣壳直径为85～100nm，具有囊膜的病毒粒子直径一般为130～170 nm，但在羽毛囊上皮细胞中形成的有囊膜的病毒粒子直径可达273～400 nm。MDV的基因组核酸为线性双链DNA，全长约180 kbp，目前已经完成所有血清型代表毒株的全基因组测序工作，并对许多致病基因 (如pp38基因和meq基因等) 和诱导保护性抗体的基因 (如gB基因等) 进行了定位。

MDV是一种典型的细胞结合性病毒，它和细胞相互作用的类型有3种： 即增殖性感染(或生产性感染)，潜伏感染和转化感染。

1.增殖性感染 在增殖性感染中，根据病毒DNA复制、抗原合成以及是否产生完整的具有感染性的病毒粒子而进一步分为完全增殖性感染和限制性增殖感染。完全增殖性感染主要发生于羽毛囊上皮细胞，可产生大量有囊膜的具有高度传染性的病毒粒子，这些病毒存在于羽毛囊上皮细胞及脱落的皮屑中，在外界环境的抵抗力强，在传播本病方面有极其重要的作用。限制性增殖感染主要发生于某些淋巴细胞、上皮细胞和大多数培养细胞中，产生的大部分病毒无囊膜，不具有感染性，并随感染细胞的死亡而失活。

2.潜伏感染 病毒的某些基因可能被转录，但不发生蛋白转译，因此很难发现病毒或肿瘤相关抗原，目前这类感染通过DNA探针杂交或体外培养激活病毒基因组的方法可以查出。

3.转化感染 主要发生于血清1型MDV感染的细胞。与潜伏感染不同，它主要以基因组有限表达为特征，因此可以检出血清1型MDV特有的磷蛋白(pp38)以及许多与转化细胞相关的非病毒蛋白，如MD肿瘤相关表面抗原 (MATSA)。

根据抗原性不同，马立克氏病病毒可分为三种血清型，即血清1型、2型和3型。血清1型包括所有致瘤的马立克氏病病毒(含强毒及其致弱的变异毒株);而血清2型包括所有不致瘤的马立克氏病病毒;血清3型包括所有的火鸡疱疹病毒及其变异毒株。

血清1型病毒在鸭胚成纤维细胞或鸡肾细胞培养上生长缓慢并产生小蚀斑。血清2型和3型病毒均在鸡胚成纤维细胞上生长良好，其中2型病毒可产生一些大的合胞体和中等大的蚀斑，3型病毒主要产生大蚀斑。

马立克氏病毒可以在鸡胚和雏鸡体内繁殖。将MDV接种于4日龄鸡胚的卵黄囊内并于接种后12～15天检查，可在鸡胚的绒毛尿囊膜上发现有小点或直径1～2mm的白色斑点病灶，病灶的数量与接毒量有关。将MDV直接接种到11日龄鸡胚的绒毛尿囊膜上亦可于5天后产生同样的病灶。本病毒对刚出壳的雏鸡有明显的致病力，腹腔接种马立克氏病病毒的雏鸡常于接种后2～4周在某些器官、神经中产生显微镜下可见的病变，3～6周后可产生眼观病变。因此，雏鸡是重要的实验动物。雏鸡的发病率、病死率以及病变产生的严重程度与鸡的品种以及病毒的毒力有关系。

本病毒既可在细胞结合状态下存活，又可在脱离细胞状态下存活，而在这两种状态下的生存特性有很大区别。细胞结合性病毒或无囊膜的不完全病毒的活力取决于细胞本身，二者同生共死。而有囊膜的完全病毒抵抗力较强，有学者报道皮屑内或羽毛囊上皮排出的脱离细胞的病毒可在鸡粪或垫草中于室温下生存4～8个月;4℃时至少10年仍有感染性。

不同的MDV株，其毒力差异很大。Settnes (1982)根据病毒的致病力不同将其分为4类：

(1)引起急性型MD的毒株 这类毒株的毒力强，可在内脏器官、皮肤和肌肉中引起淋巴细胞性肿瘤;

(2) 引起古典型MD的毒株 这类毒株的毒力较低，主要引起外周神经和性腺的病变;(3) 无致病力的毒株 不产生肉眼可见的肿瘤病变;

(4) 毒力超强的毒株 这类毒株的毒力超强，HVT疫苗对其无免疫保护作用。

MDV对理化因素的抵抗力较强，污染的垫草在室温下经16周仍有感染力。但常用的化学消毒剂以及温热(60℃)可在10min内使其灭活。pH4以下或10以上能迅速死亡。

【流行病学】

1.易感动物 鸡是马立克氏病最重要的宿主，鹌鹑、火鸡也可以自然感染。鸡的年龄与本病的易感性关系密切，年龄越轻易感性越高，1日龄雏鸡最易感。本病在其他物种中的感染不但少见，而且无重要意义。自然感染MD的蛋鸡，最早3周龄就能发病，2～5月龄之间多发。肉仔鸡多在40日龄之后发病。一般感染日龄越早，发病率越高，但发病率和病死率差异较大，发病率5%～80%，病死率和淘汰率为10%～80%。

2.传染源 病鸡和隐性感染鸡是主要的传染源。隐性感染鸡可终生带毒并排毒，其羽毛囊角化层的上皮细胞含有病毒，是重要的传染源。

3.传播途径 呼吸道是病毒进入体内的最重要途径。此外，病鸡羽毛囊上皮细胞中具有高度传染性的病毒可以随羽毛和皮屑脱落到周围环境中，通过孵化箱、育雏室和空气进行传播。昆虫 (甲虫) 和鼠类也可成为传播媒介。但MDV不经卵传递。

4.流行形式及因素 本病具有高度接触传染性，病毒一旦侵入鸡群，其感染率几乎可达100%。本病的发生与饲养管理条件有密切关系，饲养密度越大，感染机会越多，发病率和病死率也越高。在自然条件下，由于病毒株毒力差异较大，所引起的病变种类和强度有很大的不同。强毒株引起急性型MD较多，而且内脏常发生肿瘤。弱毒株一般引起神经型MD较多，内脏发生肿瘤的比例较低。

患有传染性法氏囊病、球虫病、传染性贫血等疾病都能促使本病的发生和流行，而由于MD的存在，可使球虫病更为严重，并降低药物的疗效。

除了环境、疾病因素之外，应激与本病的发生关系也很大，如长途运输、注射疫苗、捕捉、更换饲料等均可促进本病的发生。

马立克氏病在体内的感染过程可分为4个阶段。

第1阶段为早期生产性—限制性病毒感染。病毒通过呼吸道进入体内后，在侵入局部被吞噬，此后不久即进入法氏囊、脾和胸腺等靶器官，并引起初期的变性变化。这一阶段5～7天。

第2阶段为潜伏感染。这一阶段是持久的，并能在鸡体内终生存在。

第3阶段是生产性—限制性感染的第2期。研究表明，易感鸡淋巴器官在持久免疫抑制的同时，于感染2周或3周后会再次受到侵害，发生溶细胞性感染，并在各种内脏器官的上皮源性组织中形成局限性病灶。

第4阶段为淋巴样细胞非生产性感染的增生期，最终可能形成淋巴瘤或不形成淋巴瘤。淋巴瘤的成分很复杂，主要是由T淋巴细胞演化而来。

总之，T淋巴细胞的肿瘤化和肿瘤的多中心性生长以及由此而造成的多组织器官损害，是MD最重要的发病环节。

【临诊症状】 本病人工感染的潜伏期比较短。若在1日龄攻毒，感染鸡于2～3周龄开始排毒，3～4周龄出现症状和肉眼病变。自然感染病例的潜伏期受病毒的毒力和感染剂量等影响，大多比较长，3～4周至几个月不等。一般以8～9周龄以上鸡发病严重，也有3～4周龄鸡暴发本病的报道。产蛋鸡可能在16～20周龄才出现症状。根据病变发生的主要部位和症状，可分为急性型 (内脏型)、神经型 (古典型)、皮肤型、眼型4种类型：

内脏型： 常侵害幼龄鸡，病死率高。病程初期，因肿瘤体积小，患鸡常无明显症状。随着肿瘤的迅速生长和扩散，病鸡逐渐出现精神委靡，呆顿，食欲下降，明显消瘦，常缩颈蹲在墙角处。病鸡羽毛松乱无光泽，皮肤苍白，排绿色稀便。往往发病半个月左右死亡。

神经型： 由于病变部位不同，症状有很大区别。当支配腿部运动的坐骨神经受到侵害时，病鸡开始只见走路不稳，逐渐看到一侧或两侧腿麻痹，严重时瘫痪不起。典型症状是一腿向前伸，一腿向后伸的“大劈叉”姿势。病侧肌肉萎缩，有凉感，爪子多弯曲。当支配翅膀的臂神经受侵害时，病侧翅膀松弛无力，有时下垂，如穿“大褂”。当颈部神经受侵害时，病鸡的脖子常斜向一侧，有时见大嗉囊及病鸡蹲在一处呈无声张口气喘的症状。

皮肤型： 病鸡煺毛后可见体表的毛囊腔形成结节及小的肿瘤状物 (见彩图74)。在颈部、翅膀、大腿外侧较为多见。肿瘤结节呈灰黄色，突出于皮肤表面，有时破溃呈桑椹样。

眼型： 病鸡一侧或两侧眼睛失明，瞳孔边缘不整齐呈锯齿状，虹彩消失，眼球如鱼眼，呈灰白色。

【病理变化】

内脏型： 以众多的内脏出现肿瘤为特征。肿瘤病灶广泛见于肝脏、腺胃、心脏、卵巢、肺脏、肌肉、脾脏、肾脏等器官组织。其中以肝脏、腺胃的发生率最高。肝脏表现为肿大、质脆，有时为弥漫型的肿瘤，有时见粟粒大至黄豆大的灰白色瘤，几个至几十个不等 (见彩图75)。这些肿瘤质韧，稍突出于肝表面，有时肝脏上的肿瘤如鸡蛋黄大小。腺胃肿大、增厚、质地坚实，浆膜苍白 (见彩图76、彩图77)，切开后可见黏膜出血或溃疡。心脏的肿瘤常突出于心肌表面，米粒大至黄豆大 (见彩图78)。卵巢呈菜花状，肿大4～10倍不等 (见彩图79)。肺脏呈实质样变，质硬，在一侧或两侧可见灰白色肿瘤。肌肉的肿瘤多发生于胸肌和腿肌，呈白色条块状 (见彩图80、彩图81)。脾脏肿大3～7倍不等，表面可见针尖大小或豆粒大的肿瘤结节 (见彩图82)。严重者可见嗉囊肿瘤 (见彩图83)。

神经型： 病变多见坐骨神经、臂神经、迷走神经肿大，粗细不均，银白色纹理和光泽消失，有时发生水肿。除神经组织受损外，性腺、肝、脾、肾等内脏器官也会形成肿瘤。

皮肤型： 病变主要表现为皮肤毛囊肿大，毛囊周围组织有大量单核细胞浸润，真皮内出现血管周围淋巴细胞、浆细胞等增生。

眼型： 特征性病变是虹膜和睫状肌肉的单核细胞浸润，有时出现骨髓样变细胞。病变部的浸润细胞常为多种细胞的混合物，其中有小淋巴细胞、中淋巴细胞、浆细胞及淋巴母细胞。

马立克氏病的病理组织学特征表现为各感染组织和器官的血管周围有淋巴细胞、浆细胞、网状细胞、淋巴母细胞以及少量巨噬细胞等多形态细胞的增生、浸润。在生长缓慢的肿瘤中，细胞形态较为多样，生长比较快的肿瘤以成熟的细胞占优势。有时还可见到一种形体很大、胞浆嗜碱性并嗜哌咯宁性和有空泡的“马立克氏病细胞”，它是一种变性的胚型细胞，电镜观察在其胞核内含有疱疹病毒粒子，这是诊断本病的一种特征性细胞。

外周神经的病变包括轻度的炎性细胞浸润，有时伴有水肿，髓鞘变性和神经膜细胞增生。发生肿瘤脏器的组织学变化与外周神经的变化相似，由小型和中型淋巴细胞、成淋巴细胞、马立克氏病细胞以及活化了的原始网状细胞所组成。

淋巴器官 (法氏囊、脾脏和胸腺) 中，法氏囊可出现皮质、髓质的萎缩、坏死和滤泡间的淋巴样细胞浸润。胸腺也常见萎缩，但有些病例可见淋巴样细胞增生区。脾脏在急性病例中常见淋巴瘤样变化。

【诊断】 对本病的诊断可根据流行病学特点、临诊症状、病理变化、病毒分离鉴定和血清学检查等进行。其中病理组织学检查对该病诊断具有特别的指征意义，可用于确诊。按照《鸡马立克氏病诊断技术》 (GB/T 18643—2002) 进行诊断。

在国际贸易中，无指定诊断方法，替代诊断方法为琼脂凝胶免疫扩散试验 (AGID)。

病料样品采集： 用于病毒分离的材料可以是羽髓或从抗凝血中分离的白细胞，也可以是淋巴瘤细胞或脾细胞悬液。

病毒分离鉴定： 可取病鸡的肿瘤组织、血淋巴细胞或单核细胞悬液接种鸭胚成纤维细胞或鸡胚肾细胞，待细胞出现蚀斑后采用荧光抗体染色或特异性的单克隆抗体作鉴定。

血清学检查： 常用的方法是琼脂扩散试验，其检验方法有两种，一种是用已知血清检查待检鸡羽毛囊中的抗原，另一种是用已知抗原检查待检鸡的血清。不论用哪种方法，都只能确定是否感染MDV，而不能确定有没有发生肿瘤，因此经常检查鸡群的健康状况是十分重要的。另外，还可用荧光抗体法、酶标抗体法、聚合酶链式反应 (PCR)、DNA探针和电镜技术对本病进行诊断。

本病需注意与鸡淋巴细胞性白血病相区别，鉴别要点见下表。

MD与淋巴细胞性白血病鉴别要点