五、实验室检验
实验室检验是猪病诊断的重要技术支撑。其优点是结果可靠，缺点是需要昂贵的设备和较深造诣的技术人员操作，相应的检验支出很高，同时也需要一定的时间。所以，在具体的猪病诊断中，不是所有的猪病都要通过实验室检验才能确诊，只有那些对猪群健康或人类健康构成威胁的疫病才进行实验室检验。包括混合感染时难以确诊的疫病，病毒、细菌、寄生虫构成的传染性疫病，对猪群繁殖构成威胁的疫病。
(一)常用的实验室检测检验项目
临床常用的实验室检测检验项目包括常规检查、血清学检查、病原学检查三个方面。
1.常规检验。县级和重点乡、镇动物疫病检测机构和一些大型猪场的兽医室可以完成的检查。包括血常规(各类细胞计数、血沉、血红蛋白等)、尿常规(尿蛋白、尿酸盐、尿中异物等)、粪样检查(主要是寄生虫卵的检查)和组织器官的切片检查，以及细菌的分离、培养等。
2.血清学检查。是通过一些特定的生化反应，结合现代显微科学、生物科学新技术完成的检验，多数需要市级以上或重点县级动物疫病预防控制机构或者大专院校和科研机构的实验室完成。用于猪病诊断的主要是抗体检测。
3.病原学检测。是分子细胞学水平的检验。运用了病毒分离、培养、增殖，DNA的转录、扩增和鉴定，酶标记、显微照相等现代科技的最新技术。需要昂贵的设备多，需高素质技术人员操作且难度大、准确度高是其主要特点，但采样是否具有典型性，送样、样品的运输和保管条件等基本环节的失误同样会导致检验结果失真。
(二)常见猪病的检测检验项目及其方法
常规检验虽然简捷方便，但是由于接诊病例多数为死亡病猪，诊断意义有限，多数正规兽医院不做血常规。即使在规模猪场或县、乡动物疫病诊断机构，采样的病死猪，夏秋高温季节不能超过2小时，冬春低温季节也不宜超过4小时;否则，其检验结果将会误导诊断。而血样中的抗体存在时间较长，只要血样不腐败变性，依然能够反映猪感染的疫病种类。所以，猪病诊断中常用下述检测检验项目。
1.猪瘟抗体检测。抗体金试纸条法，正向间接血凝实验(IHA)和阻断吸附试验(ELISA)。
2.口蹄疫抗体检测。正向间接血凝(IHA)或阻断ELISA法。
3.伪狂犬抗体检测。乳胶凝集(LAT)和鉴别(E位点基因鉴别)。
4.蓝耳病抗体检测。间接ELISA法。
5.圆环病毒抗体检测。间接ELISA法。
6.乙脑抗体检测。乳胶凝集(LAT)。
7.弓形体抗体检测。正向间接血凝(IHA)。
8.衣原体抗体检测。正向间接血凝(IHA)。
9.猪副嗜血杆菌抗体检测。乳胶凝集(LAT)。
10.传染性胸膜肺炎抗体检测。正向间接血凝(IHA)。
11.猪瘟病原监测。夹心ELASA法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。
12.蓝耳病病原监测和鉴别。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。
13.乙脑病原监测。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)。
14.伪狂犬病原监测。聚合酶链式反应(PCR)。
15.附红细胞体、链球菌监测。显微镜检查。
16.传染性胃肠炎和流行性腹泻病原监测：聚合酶链式反应(PCR)
17.细小病毒抗原监测。聚合酶链式反应(PCR)。
18.圆环病毒抗原监测。聚合酶链式反应(PCR)。
(三)常见猪病的检验项目及其诊断意义
1.猪瘟抗体检测。通过抗体水平评价免疫效果，或判定猪瘟病毒感染时参考。
2.猪瘟病原监测。判定猪瘟病毒感染时参考。
3.口蹄疫抗体检测。通过抗体水平评价免疫效果，或判定口蹄疫病毒感染时参考。
4.伪狂犬病抗体检测。免疫猪群的免疫效果评价，未免疫猪群判定病毒感染时参考。
5.伪狂犬病抗体鉴别。用于判断免疫猪群的病毒感染。
6.蓝耳病抗体检测。免疫猪群的免疫效果评价，未免疫猪群判定病毒感染时参考。
7.蓝耳病原监测。判定已经免疫猪群的蓝耳病毒感染，或鉴别病毒类型。
8.圆环病毒抗体检测。判断猪群是否感染圆环病毒时参考。
9.乙脑抗体检测。未免疫猪群判定病毒感染时参考，免疫猪群的免疫效果评价。
10.乙脑病原监测。判定猪群乙脑病毒感染时参考。
11.弓形体抗体检测。判断猪群是否感染弓形体时参考。
12.衣原体抗体检测。判断猪群是否感染衣原体时参考。
13.猪副嗜血杆菌抗体检测。判断猪群是否感染猪副嗜血杆菌时参考。
14.传染性胸膜肺炎抗体检测。判断猪群是否患传染性胸膜肺炎时参考，或判断猪群是否感染副嗜血杆菌时的支持性参考依据。
15.附红细胞体、链球菌的显微镜检查。判断是否感染时参考。
(四)样品采集、保存、运送要求
在日常饲养管理中，为了实现健康管理的目标，要监测猪感染疫病情况，同时也要对免疫效果进行动态检测，要求饲养管理人员必须掌握采样的基本要求，便于实验室检验工作的正常进行。当然，猪群一旦发病，或者出现疫病的前兆时，同样也要采样检验。所以，采血对于一个合格的饲养人员，是一项基本技术。对于基层兽医，更是一项必须掌握的基本功。
1.样品的种类。猪病诊断时需要的样品包括病猪、尸体、血样、粪样、尿样和组织器官样品。
2.样品数量要求。送检的病猪活体、尸体和组织器官样品3份为宜，尿样3～5份为宜，具体数量视病情的严重程度和猪群大小等实际情况而定。所有样品应在6小时内送达检验单位，当天无法送达的，应在2～8 ℃环境保存。血样的采集数量因检验目的不同而异。
(1)临床诊断时采样数量：
①发生烈性传染病时，具有共同症状的发病猪3头，同圈健康猪1头，相邻圈健康猪各1头。群体较大的，还应采集相邻舍健康猪1头血样。
②发生繁殖障碍疫病时：300头以下猪场和规模较小专业户发病母猪全部采样，公猪全部采样，流产或死胎各采1头份。300头以上猪场查配种档案，同发病母猪交配公猪全部采样，健康公猪采集2头份;发病母猪采集3头份，相邻健康母猪1份，不相邻母猪1头份，流产或死胎各采2头份。
(2)正常抗体检测时：
30头以下猪群抽3头份;
30～50头猪群抽5头份;
50～80头猪群抽6头份;
80～150头猪群抽8头份;
150～300头猪群抽10头份;
300～500头猪群抽18头份;
500～800头猪群抽25头份;
800～1 200头猪群抽30头份;
1 200～1 500头猪群抽35头份;
1 500～2 000头猪群抽40头份;
2 000～3 000头猪群抽50头份;
3 000～5 000头猪群抽60头份;
5 000头以上猪群按2%～2.5%抽样。
(3)疫情监测时：
30头以下育肥猪群抽3头份(每头1份，下同)，30头以下自繁自养猪群抽4头份(母猪2头，育肥猪2头);
30～50头育肥猪群抽5头份，自繁自养猪群抽5头份(公猪1头份，母猪2头份，育肥猪2头份);
50～80头猪群抽5头份，自繁自养猪群抽6头份(公猪1～2头份，母猪2～3头份，育肥猪2头份);
80～150头猪群抽6头份，自繁自养猪群抽6头份(公猪、母猪3头份，育肥猪3头份);
150～300头猪群抽7头份，自繁自养猪群抽7头份(公猪、母猪4头份，育肥猪3头份);
300～500头猪群抽7头份，自繁自养猪群抽8头份(公猪、母猪5头份，育肥猪3头份);
500～800头猪群抽8头份，自繁自养猪群抽9头份(公猪、母猪5头份，育肥猪4头份);
800～1 200头猪群抽10头份，自繁自养猪群抽12头份(公猪、母猪6头份，育肥猪6头份);
1 200～1 500头猪群抽15头份，自繁自养猪群抽18头份(公猪5头份，母猪7头份，育肥猪6头份);
1 500～2 000头猪群抽18头份，自繁自养猪群抽20头份(公猪5头份，母猪7头份，育肥猪8头份);
2 000～3 000头猪群抽20头份，自繁自养猪群抽24头份(公猪6头份，母猪8头份，育肥猪10头份);
3 000～5 000头猪群抽24头份，自繁自养猪群抽28头份(公猪8头份，母猪10头份，育肥猪10头份);
5 000头以上按1%～1.5%抽样;自繁自养猪群按公猪60%、母猪5%～7%、育肥猪0.2%～0.5%抽样。
3.样品的运送。样品应装入2～8 ℃的低温保温箱运送，装箱前应标记清楚，严密包装。运送中应固定，防止倾倒颠覆，避免阳光直射。
(五)血样的采集方法
依据不同的划分原则，采血的方法很多。但是在具体操作中，基本方法有四种：耳静脉内采血、静脉外采血、颈静脉采血和胸腔采血。
【耳静脉内采血】此种方法采集的血样卫生纯净，可用于细菌检测和培养分离。
1.保定。采血时助手使用套猪拉环套住猪上颚，轻轻向前上方用力，使猪保持仰头，四肢直立状态。
2.采集前准备。采集者待猪挣扎3～5分钟稳定站立时，从猪的头部左(右)侧接近，用手摁压猪的耳郭根部的耳部总静脉2～3分钟，用另一只手的拇指、食指使用饱含75%酒精棉球消毒暴起的耳静脉，若耳静脉暴起不明显，可重复擦拭，并用食指轻弹欲采血的静脉，使其充分暴起。采集过程中，可用指甲稍稍用力掐猪的耳朵，使其耳部的敏感性降低。注意在擦拭和掐捏的过程中，猪会摇摆挣脱，术者应跟随猪的摇摆调整姿势，但摁压耳总静脉的手指不得放松。
3.采集血样。当猪情绪平稳时，术者右手(或左手)掌心向上平握持针(针尖斜面向上，空抽针芯0.5毫升，使得针管内有少许空气)，以小于10°角度平针刺入皮下，然后刺入血管，当看到静脉血回流到针头时，即开始用后三指和手掌用力后拉针芯抽血。对于那些血液循环较差的猪，抽血过程中应每抽0.5毫升后，后三指暂缓用力，让针芯略微回缩，之后再用力(防止血管壁贴堵针尖斜面)。如此反复多次，直至抽到需要的采集量为止。
4.采集后的处置。当采集到足够的血样时，术者应先放开摁压耳总静脉的手指，然后将左(或右)手持干净的棉球(或拭子)摁压进针处(最好是血管的进针处)，之后再小心退出针头。退出后应立即按要求处置血样。
(1)一般进行血清学检验的血样采集量为2～3毫升，采集后应继续吸入少量空气，倾斜放置15～25分钟，待针管内血样呈斜面凝固并析出少量血清时，方可移动送检。
(2)当进行猪瘟病原学检测时，一般在准备时针管中已经抽进了3毫升的抗凝剂，采集血样至10毫升(血液7毫升)时退针，退针后应立即反复颠倒和摇动，使抗凝剂和血液充分混匀。
【静脉外采血】此种采血方法适用于那些血液循环障碍明显病例，采集的血样只能进行抗体检测，不可用于细菌培养和分离。
采集前准备、保定、采集后处置和耳静脉内采血相同。只是采血时使用洁净针头，垂直(或呈60°角度)刺入血管，让血液流在耳面，然后以没有针头的针管直接在耳面抽吸至规定量。操作时左手(或右手)食指在下和拇指在上配合摁压耳总静脉的同时，其余三指配合从下方托耳郭，在右手(或左手)所持针管的配合下，使得针刺放血处成为一个小凹陷，便于采血。
专家提示
应待放血至一定量时再抽吸(1.5毫升以上抽吸最佳)，抽吸过早，往往因采血量不够反复抽吸而导致针管吸口堵塞，采集的血样泡沫很多，血清很少。
【前腔静脉采血】此种采血方法适用于月龄内小猪和耳静脉采血困难的病猪。采血时将猪仰卧放置于手术台上，助手两手分别拉住猪的两后肢、两前肢，使猪处于四肢向后状态。术者先行以左手拇指或食指在猪的锁骨孔前右侧气管侧面感触寻找颈部的前腔静脉，找到后右手以碘酒消毒进针部位，再以酒精棉球脱碘，3～5秒后，右手持针(预先回抽0.5毫升空气)以60°角缓慢刺入，边刺入边观察针头，发现回血时停止刺入，立即回抽针芯，抽血至需要的采集量后退针，左手以干拭子或洁净消毒干棉球摁压针孔数秒后放开。
【胸腔采血】此种采血方法较少用，只用特殊的心脏内血液检测项目。采血时将猪右侧向下卧放置于手术台上，助手两手分别摁压住猪的两后肢、两前肢，使猪处于自然侧卧状态。术者先行以左手拇指或食指在猪的肩肘后缘触摸寻找4～6肋骨间隙的进针点，确定后右手拇指或食指摁压。左手以碘酒消毒进针部位，再用酒精棉球脱碘，3～5秒后，右手持(预先回抽0.5毫升空气)针以90°角缓慢刺入，边刺入边观察针头，发现回血时停止刺入，立即回抽针芯，抽血至需要的采集量后退针，左手以酒精棉球消毒后放开。
【血样采集的注意事项】采集血样时应注意以下五个方面的事项。
1.选择合适的采血对象。依据检验目的选择采样对象。临床诊断采血时应当选择症状与众多病猪相同的个体采血。检测免疫效果应当选择接种灭活疫苗(死苗)30日以上的健康个体，或选接种弱毒活疫苗(活苗)20日以上的健康个体。监测疫病应当选择不同类群的个体，除引种时种公猪全部采样外，繁殖母猪和后备母猪、商品猪群随机抽样，不健康个体必须抽样。
2.标号。对来自不同类群、不同猪舍的血样应当标记清楚。通常使用“记号笔”直接标注到针管上。在无“记号笔”的情况下，也可用普通圆珠笔写在白胶布上，而后粘贴在针管上。
3.弯针头。为了避免血样在保存和运送过程中流失，可采用“弯针头”的办法。即用止血钳夹住针头向针管方向折弯，使针尖同针管呈15°以下锐角，然后再带上针头帽。
4.血样的简单处理。计划进行血清学检验的血样，采集后针管内应继续抽入少量空气，倾斜放置，等待血样凝固，方可移动血样(有条件的可离心处理血样)。计划进行猪瘟病原监测的血样，采集前应抽吸2～3毫升抗凝剂，采血后应迅速颠倒摇动针管，使其充分摇匀，以免影响化验结果的准确性。
5.小心种公猪和母猪。种公猪和母猪的体型大、力量大，1个人很难保定它，可采用套猪拉环套住猪上颚后固定在钢栏架或其他固定物体上，以防挣脱。
(六)粪样、尿样、组织器官样品的采集
多数情况下养猪人采集血样送检，兽医为了省事或迫于无奈，只好被动地通过血样的检验结果来判断。事实上，某些猪病的判断，需要粪样、尿样和组织器官的检验结果支持。
1.粪样的采集。当怀疑猪群感染消化道寄生虫病，或者有黏性稀便、水样稀便症状时，送检病料除了应有血样之外，还应有粪便样品。
(1)活体粪便样品的采集：使用3～5个棉拭子蘸取少量粪便，然后放入洁净玻璃瓶中，按紧甁塞或拧紧瓶盖即可送检。若为水样稀便的，也可用一次性注射器抽取3～5毫升后，盖紧针头帽送检。
(2)病死猪粪便样品的采集：如果病猪已经死亡，有条件的最好送病死猪尸体让兽医自己采样;否则，可剖开腹部，分别截取带有粪便的小肠5厘米、直肠5厘米、整段盲肠连通结肠、回肠各5厘米，扎口后即可送检。
2.尿样的采集。当怀疑病猪的泌尿生殖道感染时，除了送检血样之外，还应采集尿样送检。
(1)活体尿样的采集：使用一次性注射器，抽取未污染尿液3～5毫升后，盖紧针头帽即可送检。
(2)病死猪尿样的采集：如果病猪已经死亡，有条件的最好送病死猪尸体让兽医自己采样，也可剖开腹部，摘取带有尿的膀胱，扎口后送检。
3.组织器官等样品的采集。通常怀疑病猪为混合感染病例时，除血样外，还应采取组织器官病料。
怀疑病毒病的必须摘取淋巴结作为样品。
怀疑猪瘟感染的，应采集颌下前、后淋巴结，盲、结肠，肾脏，脾脏，喉头和会厌软骨、扁桃体，以及皮肤样品，其他器官样品可不采集。
怀疑蓝耳病的，应采集肺脏、心脏、肾脏和淋巴结样品，其他样品可不采集。
怀疑伪狂犬病和圆环病毒病的，应采集胃、肾脏、肝脏和胆囊、髂骨前淋巴结样品，其他样品器官可不采集。
怀疑口蹄疫的，应采集心脏、完整的头和蹄样品，其他器官样品可不采集。
怀疑乙脑的，应采集脑样品或整个猪头，其他器官样品可不采集。
(1)淋巴结的采集：腹股沟淋巴结、颌下前后淋巴结、髂骨前淋巴结为必须摘取的淋巴结，其他淋巴结只选取有肿大、充血、出血、淤血和坏死病变的摘取。摘取的淋巴结应单独标记、分类包装后送检。
(2)喉头、会厌软骨、气管、扁桃体、颌下腺的采集：先行剥离并摘取5～10厘米气管，完整摘取喉头、会厌软骨、舌和腭扁桃体后，分别包装送检。
(3)实质性脏器的采集：心、肝、脾、肺、肾、胰等实质性脏器样品的采集时多数整体摘取。也可仅整体摘取体积较小的脾脏、肾脏和心脏，肝脏和肺脏只摘取病变的局部(大小比照肾脏)。
所有实质性脏器样品应单独包装送检。
(4)管腔样品的采集：胃、肠、胆囊、膀胱、子宫、输卵管等管腔类样品，采集带有病变的局部即可。不带内容物的，应记录内容物的量、颜色和质地;带内容物的可预先排除，仅留少量供观察取样;或分段摘取后扎口送检。
(5)脑样品的采集：取猪头送检，由兽医采集脑样。
(6)胎儿和胎衣：遇到早产、流产、死胎、木乃伊病例时，除了采集母猪血样外，还应将胎儿连同胎衣一起送检。
(7)皮肤和四肢样品的采集：当遇到毛孔出血或溃疡病例时，应采集典型病变部位的带毛皮肤(连同皮下结缔组织)送检;关节肿胀、肢体溃烂、蹄部有疖子、溃斑、出血或淤血斑块的，应将病变肢体完整摘取送检。
(8)其他样品的采集：尾巴、耳朵、舌、卵巢、睾丸、阴茎、尿道口、阴门、肛门有病变的，可全部摘取送检。眼睑、牙龈、上下腭等有病变但无法摘取的，可将整个头摘取送检。
