【技能训练】 病料的取材、送检及尸体处理

一、训练目标

学会被检病料的取材、包装、送检和记录;掌握尸体处理方法。

二、训练用设备和材料

刀、剪、镊子、器皿、软木塞、橡皮塞、载玻片、注射器和针头、3.8%柠檬酸钠、福尔马林、30%甘油缓冲溶液、50%甘油缓冲盐水、5%石碳酸水、饱和盐水等。

三、训练内容及方法

(一)病料的采取

1.解剖前检查

凡发现患畜有急性死亡时，未解剖之前，先进行检查，如怀疑是炭疽时，则不可随意解剖，可采取患畜的末梢血管的血液抹片染色镜检，检查是否有炭疽杆菌存在。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。

2.取材时间

内脏病料的采取，须于患畜死后立即进行，最好不超过6 h，否则侵入其他细菌，尸体易于腐败，影响病原体的检出。

3.器械的消毒

刀、剪、镊子、器皿、橡皮塞、载玻片、注射器和针头等用具和器械，使用前均需经过灭菌处理并妥善保存。采取一种病料，使用一套器械与容器，不可混用。

4.病料采取

采取病料应根据不同的传染病，有目的地采取脏器或内容物。在无法估计是何种疫病时，可进行全面采取。为了避免污染杂菌，检查病变应待取材完毕后再进行。

(1)脓汁。用灭菌注射器或吸管抽取或吸出脓肿深部的脓汁，置于灭菌试管中。若为开口的化脓灶或鼻腔时，则用无菌棉签浸蘸后，放在灭菌试管中。

(2)淋巴结及内脏。将淋巴结、肺、肝、脾及肾等有病变的部位尽可能采取1～2 cm3的小方块，分别置于灭菌试管或平皿中。若为供病理组织切片的材料，应将典型病变部分及相连的健康组织一并切取，组织块的大小约2 cm3左右，同时要避免使用金属容器，尤其是当病料供色素检查时(如马传贫、马脑炎及焦虫病等)，更应注意。

(3)血液。血液包括：①血清。以无菌操作吸取血液10 mL，置于灭菌试管中，待血液凝固析出血清后，吸出血清置于另一灭菌试管内，如供血清学反应时，可于每毫升中加入5%石碳酸水溶液1～2滴。②全血。采取10 mL全血，立即注入盛有3.8%柠檬酸钠1 mL的灭菌试管中，搓转混合片刻后即可。③心血。通常在右心房处采取，先用烧红的铁片或刀片烙烫心肌表面，然后用灭菌的手术刀自烙烫处刺一小孔，再用灭菌吸管或注射器吸出血液，盛于灭菌试管中。

(4)乳汁。乳房先用消毒药水洗净，最初所挤的3～4股乳汁弃去，然后再采集10 mL左右乳汁于灭菌试管中。若仅供显微镜直接染色检查，则可于其中加入0.5%的福尔马林液。

(5)胆汁。先用烧红的刀片或铁片烙烫胆囊表面，再用灭菌吸管或注射器刺入胆囊内吸取胆汁，盛于灭菌试管中。

(6)肠。用烧红刀片或铁片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔，持灭菌棉签插入肠内采取肠管黏膜或其内容物。亦可用线扎紧一段肠道(约6 cm)两端，然后将两端切断，置于灭菌器皿内。

(7)皮肤。取大小约10 cm2的皮肤一块，保存于30%甘油缓冲溶液中，或10%饱和盐水溶液中，或10%福尔马林液中。

(8)胎儿。将流产后的整个胎儿用塑料薄膜、油布或数层不透水的油纸包紧，装入木箱内，立即送往实验室。

(9)小家畜及家禽。将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中，装入木箱内，送往实验室。

(10)骨头。需要完整的骨头标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包于浸过5%石碳酸水或0.1%升汞液的纱布或麻布中，装于木箱内送到实验室。

(11)脑、脊髓。如采取脑、脊髓作病毒检查，可将脑、脊髓浸入50%甘油盐水液中或将整个头部割下，包入浸过0.1%升汞液的纱布或油布中，装入木箱或铁桶中送检。

(12)供显微镜检查用的脓、血液及黏液抹片。可用载玻片制成涂片、组织块制成触片，然后在两块玻片之间靠近两端处各放一根火柴或牙签以防两张玻片发生接触，以此类推，可重叠放置多张，最后用细线缠住，用纸包好。每片应注明号码，并附说明。

(二)病料的保存

病料采取后应采取适当的方法，使其保持在新鲜或接近新鲜状态，利于检查。

(1)细菌检验病料。脏器组织一般用灭菌的液状石蜡、30%甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液来保存病料;液体病料可装在封闭的毛细管或试管中保存。

(2)病毒学检验材料。脏器组织一般使用50%甘油缓冲盐水进行保存。

(3)血清学检验材料。从发病动物无菌采取血液，析出血清注入灭菌试管中，4 ℃或-15 ℃保存备用。

(4)病理组织学检查材料。用10%福尔马林溶液或95%酒精等固定。严寒季节为防止病料冻结，可将上述固定好的病料放入甘油和10%福尔马林溶液等量混合液中保存。

(5)几种保存剂的配制方法：

①30%甘油缓冲盐水溶液。纯中性甘油30 mL、氯化钠0.5 g、碱性磷酸钠1 g、0.02%酚红1.5 mL，将以上4种药物混匀后加中性蒸馏水至100 mL，高压灭菌30 min备用。

②50%甘油缓冲盐水溶液。氯化钠2.5 g、酸性磷酸钠0.46 g、碱性磷酸钠10.74 g，将以上3种药物溶于100 mL中性蒸馏水中，加纯中性甘油150 mL、中性蒸馏水50 mL，混合分装后，高压灭菌30 min备用。

③10%福尔马林溶液。取福尔马林溶液10 mL加入蒸馏水90 mL即成。

④饱和食盐水溶液。纯氯化钠38～39 g、蒸馏水100 mL，将氯化钠充分搅拌溶解后，用滤纸过滤，高压灭菌后备用。

⑤鸡蛋生理盐水溶液。先将新鲜鸡蛋的表面用碘酒消毒，然后打开将内容物倾入灭菌的三角瓶中，按全蛋9份加入灭菌生理盐水1份，摇匀后用灭菌纱布过滤，然后加热至56～58 ℃，持续30 min，第2天及第3天按上法再加热1次，即可应用。

(三)病料的记录、包装和运送方法

装病料的容器要一一标号，详细记录，并附病料送检单。病料包装容器要牢固，做到安全稳妥，对于危险材料、怕热或怕冻的材料要分别采取措施。一般病原学检验的材料怕热，应放入加有冰块的保温瓶或冷藏箱内送检，如无冰块，可在保温瓶内放入氯化铵450～500 g，加水1 500 mL，上层放病料，这样能使保温瓶内保持0 ℃达24 h。供病理学检验的材料放在10%福尔马林溶液中，不必冷藏。包装好的病料要尽快运送，长途以空运为宜。

(四)尸体的处理

1.尸体的运送

尸体运送前，工作人员应穿戴工作服、口罩、风镜、胶鞋及手套。运送尸体应用特制的运尸车(车的内壁衬钉铁皮，以防漏水)。装车前应将尸体各天然孔用蘸有消毒液的湿纱布、棉花严密填塞，小动物和禽类可用塑料袋盛装，以免流出粪便、分泌物、血液等污染周围环境。在尸体躺过的地方，应用消毒液喷洒消毒，如为土壤地面，应铲去表层土，连同尸体一起运走。运送过尸体的用具、车辆应严加消毒，工作人员用过的手套、衣物及胶鞋等亦应进行消毒。

2.处理尸体的方法

(1)掩埋法。这种方法虽不够可靠，但比较简单，所以在实际工作中仍常应用。此法有以下步骤：

①地址的选择。选择远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静地方;土质宜干而多孔(沙土最好)，以便尸体加快腐败分解;地势高、地下水位低，并避开山洪的冲刷。

②挖坑。坑的长和宽度以能容纳侧卧之尸体即可，从坑沿到尸体表面不得少于1.5～2 m。

③掩埋。坑底铺以2～5 cm厚的石灰，将尸体放入，使之侧卧，将污染的土层、捆尸体的绳索抛入坑内，然后再铺2～5 cm厚的石灰，填土夯实。尸体掩埋后，上面应做0.5 m高的堆土。

(2)焚烧法。可在焚尸炉或焚尸坑中进行。焚尸坑有以下几种：

①十字坑。按十字形挖两条沟，沟长2.6 m、宽0.6 m、深0.5 m。在两沟交叉处坑底堆放干草和木柴，沟沿横架数条粗湿木棍，将尸体放在架上，在尸体的周围及上面再放上木柴，然后在木柴上倒以煤油，并压以砖瓦或铁皮，从下面点火，直到把尸体烧成黑炭为止，并把它掩埋在坑内。

②单坑。挖一长2.5 m、宽1.5 m、深0.7 m的坑，将取出的土堵在坑沿的两侧。坑内用木柴架满，坑沿横架数条粗湿木棍，将尸体放在架上，之后处理如①法。

③双层坑。先挖一长、宽各2 m，深0.75 m的大沟，在沟的底部再挖一长2 m、宽1 m、深0.75 m的小沟，在小沟沟底铺以干草和木柴，两端各留出18～20 cm的空隙，以便吸入空气，在小沟沟沿横架数条粗湿木棍，将尸体放在架上，之后处理如①法。

(3)化制法。这是一种较好的尸体处理方法，因为它不仅能对尸体做到无害化处理，还能保留有价值的畜产品，如工业用油脂及骨、肉粉。此法要求在有一定设备的化制厂进行。化制尸体时，对烈性传染病如鼻疽、炭疽、气肿疽、羊快疫等病畜尸体可用高压灭菌，对于普通传染病可先切成4～5 kg的肉块，然后在水锅中煮沸2～3 h。

(4)发酵法。这种方法是将尸体抛入专门的尸体坑内，利用生物热的方法将尸体发酵分解以达到消毒的目的。尸坑应选择远离住宅、农牧场、草原、水源及道路，圆井形，深9～10 m，直径3 m，坑壁及坑底用不透水材料做成(可用水泥或涂以防腐油的木料)。坑口高出地面约30 cm，坑口有盖，盖上有小的活门(平时落锁)，坑内有通气管。如有条件，可在坑上修一小屋。坑内尸体可以堆到距坑口1.5 m处。经3～5个月后，尸体完全腐败分解，此时可以挖出作肥料。

自测训练

一、知识训练

1.流行病学诊断应弄清哪些问题?

2.简述传染病的实验室诊断方法。

二、技能训练

动物传染病病料的取材、送检以及动物尸体的处理方法。