利用实验室技术检查病料诊断原虫病的方法。寄生于家畜的原虫,其寄生部位各异,根据其寄生部位的不同,其采用的病料和检查的方法也各异。
血液内原虫的检查 在血液中可查到的病原原虫,马有巴贝斯虫和锥虫,牛、羊有巴贝斯虫、泰勒原虫、锥虫, 猪有巴贝斯虫和锥虫, 家禽有锥虫、住白细胞虫、疟原虫、血变虫等。
直接检查 血液内的原虫, 可采血直接检查, 一般用压滴法直接镜检或制成厚或薄的血液抹片, 染色检查。必要时可先进行集虫法处理。
集虫法 是采取较大量的血液, 并加抗凝离心沉淀。血液中的锥虫或感染有巴贝斯虫的红细胞, 均较正常红细胞为轻,而聚集于管底的红细胞沉淀的表层,采取表层沉淀制成血涂抹片, 染色后显微镜检查。
压滴法 此法适用于血液中锥虫的检查, 在载玻片上滴一滴生理盐水, 采血一滴与生理盐水相混, 覆以盖玻片, 即可放在显微镜下检查。冬季应适当的给载玻片加温或用显微镜载物台保温设备, 在镜下红细胞间可见到活动的虫体。
薄血片 本法适用于血液寄生的伊氏锥虫、巴贝斯虫、泰勒原虫、住白细胞虫、血变虫、疟原虫等的检查。采血一滴, 于洁净载玻片的一端, 按常规推制成血片, 待干, 甲醇固定, 而后用姬氏染色法或瑞氏染色法染色。染色后在显微镜下检查。
生殖道原虫检查法 寄生于家畜生殖道的原虫有马媾疫锥虫和牛的胎儿毛滴虫。
马媾疫的检查 检查材料主要采取公马的尿道和母马的阴道刮取物,应用长柄锐匙插入尿道或阴道,刮取病料混入适量的生理盐水, 也可用长柄镊子, 镊取一小块消毒纱布, 用生理盐水浸湿, 插入尿道或阴道中擦试, 取出后, 将纱布上附着的虫体, 洗入无菌生理盐水中, 将其离心沉淀后, 取沉淀物检查。在病畜出现皮下浮肿或丘疹症状时, 则可用消毒注射器, 插入浮肿部皮下,注射器内先吸入少量2%柠檬酸钠溶液以防混入的血液凝固, 而后抽取淋巴液, 检查。以上病料均可用压滴法或抹片染色检查。
牛胎儿三毛滴虫检查 牛胎儿毛滴虫存在于患病母牛的阴道与子宫分泌物, 公牛的包皮鞘或流产出胎儿的羊水,羊膜和第四胃内容物中。可将直径1厘米的玻璃管插入母牛阴道, 用橡皮洗耳球接于一端, 抽吸其粘液, 公牛则可用加温至30~35℃的生理盐水, 用注射针筒注入包皮腔, 按摩腔外再将冲洗液收集入广口瓶中,在流产胎儿则解剖并收集其第四胃内容物。将收集物制成压滴标本, 或离心沉淀后吸取沉渣做压滴标本或抹片,显微镜下检查。在做染色标本检查时,多采用甲醛蒸气固定法, 即将检查材料, 涂于载玻片使成一薄层。用置有20%甲醛浸湿的棉花的小培氏皿,将抹片标本面向下, 架于皿上静置一小时左右, 取下待干, 再用甲醇固定, 后按姬氏染色法染色检查。
粪便内原虫检查 家畜粪便内可检查到的寄生原虫有球虫、组织滴虫、隐孢子虫、贾第鞭毛虫、毛滴虫和结肠小袋纤毛虫等。
球虫和隐孢子虫的检查 应取新鲜排出的粪便,按蠕虫虫卵检查的方法进行检查 (见蠕虫病实验室诊断技术),即可查到其卵囊。对于球虫种类的鉴别, 常需观察其孢子形成后的形态并根据其孢子化所需的时间为依据。为此可将含有多量卵囊的粪液,加入2.5%的重铬酸钾液,将其注入培氏皿中,液层厚度不应超过2毫米。将培氏皿放于29℃温箱中进行培育, 数日后,卵囊即可完成其孢子形成。
组织滴虫、毛滴虫和结肠小袋纤毛虫的检查 这些虫除包囊期外, 多数具有运动性, 因此可以直接采取粪便, 在载玻片上与生理盐水混匀成一薄层,勿干,直接放显微镜下检查, 常可见虫体在运动, 欲观察静止的虫体, 可在粪抹片上, 滴加稀碘液, 虫体即停止运动并着色。
组织内原虫检查法 有些原虫寄生于动物体的不同组织内, 在死后剖检时, 按其寄生部位, 取一小块组织, 做抹片, 触片固定后制成切片。此外泰勒原虫病可选取肿大的体表淋巴结, 取淋巴穿刺物。弓形虫病可采取腹水进行检查。
动物接种试验 有些原生动物病, 在畜体内虫体较少, 直接检查难以发现, 可根据虫体的寄生宿主和传染途径的特点, 采取带有虫体的病料, 按一定的途径,接种于易感动物,观察其发病情况,确定其存在。
伊氏锥虫的检查 试验动物可选用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬, 但以小鼠易感性强, 发病快。可采取病畜的适量抗凝血液, 立即注射于小鼠腹腔, 接种后小鼠常在2~3天后即可在外周血液中查到锥虫, 连续观察一个月。
马媾疫锥虫 马媾疫锥虫对实验动物的感染比较困难, 仅可将含虫病料悬液, 接种于公家兔的睾丸实质中, 如有锥虫存在, 经1~2周后, 兔的阴囊、阴茎、睾丸等部发生水肿, 并在水肿液中可检出虫体。
胎儿毛滴虫 以病牛的阴道分泌物或包皮冲洗液为病料, 接种于妊娠豚鼠的腹腔内, 接种后20天内可使豚鼠发生流产, 并在流产胎儿的胎盘和消化道内见有虫体。
弓形虫 以可疑病畜的肺、淋巴结、脑、脾或肝组织, 注射于小鼠的腹腔内, 一般在4~5天后小鼠发病,死后剖检,有大量腹水。并在腹水内见有滋养体。
隐孢子虫 将可疑感染有孢子虫动物的粪便, 收集其卵囊,饲喂小鼠。5~7天后即可将小鼠剖杀。取出小肠肠段做病理切片检查肠粘膜表面有无虫体寄生。