1.病料采集的原则:病料,是在进行疾病诊断或检疫时,从患病猪体采集的可供检测分析的材料样品。病料采集是否得当,直接关系到检验结果是否正确。有时对不同疾病要采集不同的样品,差异很大。采集病料时应遵循如下原则:
(1)适时采样:根据检测要求、检测对象和检验项目的不同,选择适当的采样时机十分重要。样品是有时间要求的,应严格按规定时间采样; 有临床症状需要做病原分离的,样品必须在病初的发热期或症状典型时采样; 病死的猪应立即采样,最长不能超过6小时。
(2) 合理采样: 根据诊断检测要求,除严格按照规定采集各种足够数量的样品外,不同的疫病所需检测的样品有所区别,应按可能的疫病侧重采集。对于未能确定为何种疫病时,应全面采集。数量除满足诊断检测的需要,还应留有余地,以备必要时复检使用。
(3) 典型采样: 选取未经治疗、症状最典型或病变最明显的病例,如果有并发症,还应兼顾进行采样。
(4)无菌采样:采集的检验样品除供病理组织学检验外,还供病原学与血清学检验,所以必须无菌操作采样,采样用具、容器均须灭菌处理。尸体剖检需采集样品的,先采样后检查,以免人为污染样品。
(5)样品处理: 采集的样品应一种样品一个容器,立即密封,根据样品的性状及检验要求不同,做暂时的冷藏、冷冻或其他处理。供病毒学检验的样品,数小时内要送到实验室,只做冷藏处理,超过数小时的应冻结处理。冻结方法: 可将样品放入-30℃冰箱内冻结,然后再装入有大小冰块或干冰的冷藏箱内运送;也可将装入样品的容器放入隔热保温瓶内,再放入冰块,然后按100克冰块加入食盐约35克,立即将保温瓶口塞紧。供细菌学检验或血清学检验的样品冷藏送实验室即可。
(6)安全采样: 采样过程中,须做好采样人员的安全防护,并防止病原污染,尤其必须防止外来疫病或重大疫病的扩散,避免事故发生。
(7) 样品包装: 装盛样品的容器可选择玻璃或塑料的,可以是瓶子、试管或袋子。容器必须完整无损,密封不使液体漏出。装供病原学检验样品的容器,用前应彻底清洗干净,必要时经清洁液浸泡,冲洗干净后以干烤或高压灭菌并烘干。如用塑料容器,能耐高压的经高压消毒,不能耐高压的经环氧乙烷熏蒸消毒或紫外线消毒灭菌后使用。
(8)迅速送检: 样品经包装密封后,必须尽快送往实验室,延误送检时间,会影响诊断结果。供细菌检验、寄生虫检验及血清学检验的冷藏样品,必须在24小时内送到实验室;供病毒检验的冷藏处理样品,须在数小时内送达实验室,经冻结的样品须在24小时内送到,24小时内不能送到实验室的,需要在运送过程中保持样品处于-20℃以下。
2. 病料的采集与保存:
(1)血液样品:
①供病毒检验样品。应在猪发病初期体温升高期间采集。血液样品必须是抗凝血或脱纤血。抗凝血可选用肝素或EDTA作抗凝剂,枸橼酸钠对病毒有轻微毒性,一般不用。采血前,在真空采血管或其他容器内按每10毫升血液加入0.1%肝素1毫升或EDTA20毫克,从前腔静脉真空采血或用注射器抽取,用量少时也可从耳静脉抽取。采集的血液经密封后贴上标签,立即冷藏送实验室。
②供细菌检验样品。采血应在猪发病初期体温升高期间或发病期,并在未经药物治疗期采集。血液应加抗凝剂或脱纤,但不可加入抗生素。密封后贴上标签,立即冷藏送实验室。
③供血清学检验样品。血液不加抗凝剂或脱纤处理,采得的血液贴上标签,室温静置等凝固后送实验室,并尽快将自然析出的血清或经离心分离出的血清吸出。
④供常规检验样品。血液需加抗凝剂,防止血液凝固,抗凝剂用肝素或枸橼酸钠、EDTA均可,血液由静脉采集并与抗凝剂充分混合,尽快送实验室。
(2)组织样品: 一般由捕杀猪或捕杀垂死的猪和病死尸体剖检中采集,也可从活猪体内采集。从尸体采样时,先剥去猪胸、腹部皮肤,以无菌器械将胸腔、腹腔打开,根据检验目的和生前疫病的初步诊断,无菌采集不同的组织。从活猪采取组织样品,一般须使用特殊的器械。
①供病毒检验样品。作病毒检验的组织,必须以无菌技术采集,组织应分别放入灭菌的容器内并立即密封,贴上标签,放入冷藏容器立即送实验室。也可将组织块浸泡在pH值为7. 4左右的汉克液或磷酸盐缓冲肉汤保护液内,并按每毫升保护液加入青霉素、链霉素各1000单位,然后放入冷藏瓶内送实验室。
②供细菌检验样品。供细菌检验的组织,应新鲜并以无菌技术采集,如尸体已经腐败,某些疫病的致病菌仍可采集,取长骨或肋骨,从骨髓中分离细菌。采集的所有组织应分别放入灭菌的容器内或灭菌的塑料袋中,贴上标签,立即冷藏送实验室。
③供病理组织学检验样品。作病理组织学检验的组织样品必须保证新鲜,应选择病变最典型、最明显的部位,并应连同部分健康组织一并采集。若同一组织有不同的病变,应同时各取一块。将需要采取的组织切成厚约0.5厘米、大小1~2厘米的组织块,立即浸泡在95%乙醇或10%中性甲醛缓冲固定液内固定(10%中性甲醛缓冲固定液: 40%甲醛溶液100毫升,无水磷酸氢二钠6.5克,磷酸二氢钾4.0克,蒸馏水加至1000毫升)。固定液容积应是组织块体积的10倍以上,样品密封后加贴标签送实验室。
(3)粪便样品: 分离病毒的粪便必须新鲜。少量采集时,以灭菌的棉拭子从直肠深处蘸取粪便,并立即放入灭菌的试管内密封;须采集较多量的粪便时,可直接收集粪便。所收集的粪便装入灭菌的容器内。作细菌检验的粪便,最好是在使用抗菌药物之前采集。
(4)皮肤样品:采集有病变的皮肤,进行病原分离、病理组织学检验或寄生虫检验。供检验的皮肤样品病变应明显而典型。采集捕杀或死后的猪皮肤样品,用灭菌器械取病变部位及交界处的小部分健康皮肤;活猪的病变皮肤如水疱皮、结节或痂皮等可直接剪取。
(5)生殖道样品: 主要是猪死胎、流产的胎儿、胎盘、阴道分泌物、冲洗液、阴茎包皮冲洗液、精液等。流产的胎儿及胎盘可按采集组织样品的方法无菌采集; 精液以人工采精方法收集; 阴道、阴茎包皮分泌物可用拭子从深部取样。所采集的各种样品,按检验目的保存和送检。
(6)分泌物和渗出液:包括眼、鼻、气管和口腔分泌物,乳汁、浓汁、阴道渗出液、皮下渗出液、胸腔和腹腔渗出液、关节渗出液等。眼、鼻、气管和口腔分泌物以拭子采集,其他能抽取的则抽取。