1.脊髓液的采集

1) 腰椎穿刺法

犬取侧卧或坐位保定，穿刺位点为最后腰椎与荐椎处，用穿刺针于最后腰椎和荐椎间凹陷处垂直向下刺入，刺入一定深度后，可感到有一个阻力，当刺透硬膜后，阻力突然消失，这时将穿刺针的内芯拔出，将有透明的脊髓液涌出。犬可用长2.5cm的注射器进行。

2) 脑后穿刺法

宠物在全身麻醉下，侧卧保定，将头颈伸直并向前倾斜，术部剪毛后消毒，将穿刺针沿环椎两侧翼连线中点刺入。穿刺时应将宠物的头部保定好，以免刺入时宠物突然抬头，伤及大脑。脑后穿刺平均深度为36.0+3.96mm。计算方法为颈围(cm)/10+1cm或体重×3/50+1.6cm。

2.脑脊液的组成和检查

脑脊液中的化学物质有蛋白质、糖、盐类等。当中枢神经系统有疾患时，其成分会发生变化，此外，身体其他的代谢障碍性疾病时，脑脊液的成分也会受到影响。

1) 物理学检验

(1)颜色。正常脑脊液为无色，但无色的脑脊液并不能排除神经系统的疾病。如病毒性脑炎脑脊液常呈无色透明外观。

乳白色：多因白细胞增多所致，急性化脓性脑膜炎时，因脑脊液中含有大量的白细胞，常呈乳白色，甚至呈米汤样浑浊。结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎、霉菌性脑膜炎及一般性脑炎时，白细胞中度增多，脑脊液外观呈毛玻璃样。

红色：常因混入血液所致，如因穿刺损伤所致，其特点为脑脊液开始时为红色，以后流出的脑脊液红色越来越浅至无色，离心后上清液仍为无色。如果是病理性所致，脑脊液为均匀红色，经离心后上清液仍为红色或黄色。

黄色：形成的原因最多见的有以下几种。

脑内陈旧性出血，出血后4～8小时即可开始溶血，出血一周后黄色最深，以后又因色素被吸收逐渐变浅。常见于蛛网膜下腔出血、脑膜炎、脑肿瘤。

脑脊液含有大量蛋白所致的黄色，该脑脊液一般容易凝固，淋巴细胞增多，隐血试验为阴性，多因脊髓肿瘤或脊椎肿瘤使脊髓液循环受阻所致。

重症黄疸或应用某些化学药物也可致脑脊液呈黄色，潜血试验为阴性。

(2)透明度。正常脑脊液澄清透明，当脑膜有病理性改变时，脑脊液会因细菌或细胞的存在而呈现不同程度的浑浊，如化脓性脑膜炎时，白细胞大量增加，脑脊液呈脓样乳白色。结核性脑膜炎时，白细胞中度增加，脑脊液呈轻度毛玻璃样浑浊。

报告方式： 可用清亮、微混、浑浊等描述。

2) 化学检验

(1) 蛋白含量的测定 (比浊法)

原理： 利用磺基水杨酸钠与蛋白质作用会发生沉淀的原理，与经同样处理的标准蛋白液比浊，可定量测定脑脊液中的蛋白质含量。

①试剂： 3%磺基水杨酸钠溶液。

②标准液的配制： 取健康宠物空腹时的血清5ml，用双缩腺法 (biuret法) 测定其蛋白浓度，用生理盐水稀释成每升中含有20mg、40mg、80mg、120mg、160mg、200mg标准液。分别取上述标准液0.5ml放入试管内，再分别加入3%磺基水杨酸钠溶液2.0ml，混合后即成标准液。

③标准曲线的制作： 两根试管分别放入0.5ml脑脊髓液，一试管加入3%磺基水杨酸钠2.0ml，另一试管加入生理盐水2.0ml，混合后放置10分钟后使用。用生理盐水作对照，用620nm光测定。根据标准曲线算出浓度。

④判定： 正常值 (mg/dl)： 犬为27.5; 猫低于20。

(2) 球蛋白反应

①Nonne-apelt反应

a.试剂： 硫酸铵约85g加100ml水，用微火边加热边使其溶解 (不可煮沸变酸)，存放几天后过滤使用 (如果变酸加氨水至中性)。

b.操作： 取上述试剂0.5ml放入小试管内，在上层加入等量的脑脊液，3分钟后看两界面是否产生白环 (如果产生白环说明有球蛋白)。然后振荡试管混合两种溶液，看浑浊程度。

c.判定： 透明——(-)

痕迹白浊——(±)

轻度白浊——(+)

强度白浊——(++)

乳样白浊——(+++)

②Pandy反应 (潘氏球蛋白定性试验)

a.试剂： 取石炭酸10ml加100ml水，放入37℃水浴中强烈振荡数小时，在室温下放置数日，分离出石炭酸饱和溶液以备使用。

b.操作： 取上述试剂2～3ml放入试管内，从试管的边缘慢慢加入1～2滴脑脊液，3分钟后在黑色纸上观察两液面接触部的变化。

c.判定：淡白色透明——(-)

乳白色——(+)

浑浊——(++)

重度浑浊——(+++)

乳样浑浊——(++++)

(3) 葡萄糖定量试验 (Gander法)

①原理：强碱溶液与糖混合后加热，根据含糖量的多少，颜色可由淡黄变成暗褐色。本法简单又不受非糖性还原物的影响。

②试剂： 1%苦味酸钠、10%碳酸钠溶液、标准液(取每升含100mg的纯葡萄糖溶液，分别制成每升含10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg的糖溶液)。

③操作：取0.5ml脊髓液置于试管中，加1%苦味酸液0.5ml，10%碳酸钠溶液0.5ml混合后，煮沸8分钟，与标准液一起比色。

④判定：脑脊液糖的含量通常较血糖值低，大部分宠物糖的含量为40～80mg/dl，化脓性脑膜炎、髓膜肿瘤时糖的含量减少。正常值： 犬为64mg/dl。

(4) 氯化物测定。氯化物在脑脊髓液无机物中占有大部分，比血液中高，化脓性脑膜炎时减少。原因： 一是重度呕吐导致低氯血症;二是血浆低氯浓度为了平衡，大量氯离子进入血液。此外，脑脊液中蛋白的增加使得氯被置换。

犬正常值为122～138mEg/L，猫正常值为125～175mEg/L。

(5) 细胞数和细胞的鉴别。脑脊液中细胞数的计算和白血球的计算方法相同，使用Fuchs-Rosenthal法比较方便。

白血球用Fuchs-Rosenthal计数器 (计数池的面积： 4×4=16mm2，深度0.2mm，容积3.2mm3)。

下面两种稀释液比较好：

a.Pappenheim液： 醋酸钠0.2g+醋酸4.0ml+水40ml;

b.Samson液： 醋酸30ml+石炭酸2.0ml+品红酒精溶液 (1∶10) 2.0ml+水100ml。

判定：

细胞数正常值大部分宠物是1mm3中0～10个。

细胞的种类分为单核细胞和白细胞等，当分叶型白细胞增加时，多由急性或亚急性疾病引起; 淋巴细胞增加时，多由病毒性疾病引起。

正常值 (1mm3中)： 犬为5±2个，猫为0～3个。