(一)病原学诊断

猪水泡性疾病包括口蹄疫、猪水泡病、猪水泡性疹和水泡性口炎，都以口、蹄等皮肤黏膜发生水泡和溃烂为特征，需经病原学和血清学鉴定才能最后确诊。该病的病原学和血清学诊断只能在国家指定的实验室进行。

1. 口蹄疫(FMD)：

(1) 病料采集。采集多头症状明显猪的水泡皮 (2克左右)，加含50%甘油的pH值为7.6磷酸盐缓冲液 (PBS) 10毫升，或无菌抽取水泡液2毫升; 或采病后2～4周的患猪血液10毫升，分离血清，加青霉素1 000单位/毫升，链霉素1 000微克/毫升，低温条件下尽快送往国家指定的实验室进行鉴定。

(2) 动物试验。用2～4日龄乳鼠，颈背部皮下注射0.2毫升/只; 也可用3 ～5日龄乳兔，皮下接种1毫升/只; 或400克以上豚鼠后肢跖部皮内交叉穿刺接种0.05毫升/只，或跖部皮下接种0.2毫升。接种后2～4日，乳鼠、乳兔呈现麻痹症状，最后窒息死亡; 豚鼠跖部出现水泡。无菌剪掉病死的乳鼠皮肤，留取胴体为病毒材料; 在豚鼠则留取跖部水泡皮为病毒材料。将上述材料剪碎研磨制成悬液如上连续传3～5代后低温保存。若感染动物无症状，应于72小时内捕杀，盲传3～5代。也可为30千克左右的断乳仔猪蹄接种，或2岁以内犊牛舌面接种，接种后2～7日内出现口蹄疫典型症状。

(3) 电镜观察。用病料或培养物按常规方法初提纯，在电镜下观察病毒粒子形态，作为病原学诊断的参考。

2. 猪水泡病 (SVD)：

(1) 病料采集。无菌采取患猪水泡液或刚破溃的水泡皮，加入抗生素液 (水泡皮先研磨)，用PBS进行5～10倍稀释，4℃浸泡过夜，或置室温4小时，离心除沉淀物，上清液即为待检病毒液。

(2) 动物试验。将病毒液接种1～3日龄乳鼠，出现特异性麻痹症状，四肢强直。经2～3天死亡。其他实验动物，3日龄以上乳鼠均不发病。

3. 猪水泡性疹 (VES)：

(1) 病料采集。同其余3种水泡性病、水泡液和水泡皮处理方法相同。

(2) 病毒分离。用猪源细胞或Vero猴肾细胞系均可。病料接种到细胞单层可出现嵌环样病毒典型细胞病变 (CPE)。表现为细胞圆缩、溶解和细胞单层完全破坏。如无此细胞病变出现，需盲传至少3代方可判为阴性。

(3) 电镜观察病料或培养物初提纯后可用电镜观察到嵌环样病毒典型粒子形态。

4. 猪水泡性口炎 (VS)

(1) 病料采集。无菌采取水泡液和水泡皮。

(2) 鸡胚接种。将病料制剂接种于8日龄鸡胚绒毛尿囊膜上，37℃孵育12～24小时后鸡胚明显充血和出血，绒毛尿囊膜肥厚，一般24～48小时内鸡胚死亡。如接种后无上述病变，可收获绒毛尿囊膜继续传代。

(3) 动物试验。可将病料制剂接种青年马、牛、猪的舌上，观察水泡的产生，与口蹄疫和猪水泡病相区别。

(二)血清学诊断

1. 口蹄疫： 口蹄疫有7种血清型和60余种亚型。用于口岸检疫的方法有病毒感染相关抗原 (VIA) 琼脂扩散、正向间接血凝和食道探杯试验。检测口蹄疫病毒污染的肉品和畜产品的方法有酶联免疫吸附试验、核酸探针和免疫荧光法。

临床上以正向间接血凝试验最常用。该试验主要用于检测口蹄疫免疫抗体效价，以便制定正确的免疫程序，保障猪群免遭口蹄疫强毒的感染。也可用于诊断。

(1) 被检血清于56℃水浴灭活30分钟。

(2) 在血凝板上1～6排的1～9孔、第7排的1～4孔和第6孔、第8排的1～12孔各加稀释液50微升。

(3) 稀释待检血清。取1号待检血清50微升，并将塑料嘴插入孔底，右手拇指轻压弹簧1～2次混匀 (避免产生过多的气泡)，从该孔取出50微升移入第2孔，混匀后取出50微升移入第3孔……直至第9孔混匀后取出50微升弃去。此时第1排1～9孔待检血清的稀释度 (稀释倍数) 依次为1∶2 (1)、1∶4 (2)、1：8 (3)、1：16 (4)、1：32 (5)、1：64 (6)、1：128 (7)、1：256 (8)、1：512 (9)。

(4) 稀释阴性对照血清。在血凝板上的第7排第1孔加阴性血清50微升，倍比稀释至第4孔，混匀后从该孔中取出50微升弃去。此时阴性血清的稀释倍数依次为1∶2 (1)、1∶4 (2)、1∶8 (3)、1∶16 (4)。第6孔为稀释液对照。

(5) 稀释阳性对照血清。在血凝板上的第8排第1孔加阳性血清50微升，倍比稀释至第12孔，混匀后从该孔取出50微升弃去。此时阳性血清稀释倍数依次为1∶2、1∶4、1∶8、…1∶4 096。

(6) 加血凝抗原。被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清各孔、稀释液对照孔均各加血凝抗原 (充分摇匀，瓶底应无血球沉淀) 25微升。

(7) 振荡混匀。将血凝板置于微量振荡器上振荡1～2分钟，如无振荡器，用手轻轻摇匀亦可。然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血球沉淀为合格。盖上玻板，室温下或37℃下静置1.5～2小时判定结果，也可延至翌日判定。

(8) 判定标准。移去玻板，将血凝板放在白纸上，先观察阴性对照血清1∶16孔，稀释液对照孔均应无凝集 (血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点)，或仅出现“+” 凝集 (血球大部沉入孔底，边缘有少量血球悬浮)。

阳性血清对照1∶2、1∶4、1∶8…1∶256各孔应出现 “++～+++” 凝集为合格 (少量血球沉入孔底，大部血球悬浮于孔内)。

在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“++” 凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1号待检血清1～5孔呈现“十+～+++” 凝集，6～7孔呈现“++” 凝集，第8孔呈现“+” 凝集，第9孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1∶128。

接种口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1∶128 (即第7孔) 呈现“++” 凝集为免疫合格。

2.猪水泡病： 中和试验是诊断猪水泡病的常用方法，较易得出确切的诊断结果。也可用反向间接血凝试验、荧光抗体试验等。

3. 猪水泡性疹

(1) 中和试验只适用于检查已知特异性病毒抗原或抗体。

(2) 补体结合试验可参照口蹄疫、猪水泡病补体结合试验方法进行。

(3) 荧光试验可按常规方法进行。

(4) 酶联免疫吸附试验适用于血清学调查，检测嵌环样病毒群特异性抗原或抗体。方法按常规进行。

4.猪水泡性口炎： 猪水泡性口炎病毒与相应的免疫血清在琼脂扩散试验中出现两条沉淀线，可清楚地区分两个血清型。方法按常规进行即可。