摘要：为做好分析前血液样本的质量控制，本文对抗凝剂的合理使用、异常血液样本对测定结果的影响等问题进行了分析，并用EDTA二钾和肝素抗凝血分别做了血细胞涂片和生化测定的对比试验，结果：肝素抗凝血血细胞涂片中性粒细胞不着色，EDTA盐抗凝血钙离子检测数值为零。提示：肝素抗凝血不适用于血细胞涂片检查，EDTA二钾抗凝血不适用于钙离子检测；制备合格的血液样本，是做好分析前血液样本质量控制的关键。

关键词：血液 抗凝剂

质量控制实验室质量控制主要包括分析前、分析中、分析后检验质量的控制。而“分析前”指检验前阶段，即从取得样本到样本试验前的备用阶段。分析前质量控制是极易被忽视但却非常重要的环节，特别是血液样本的质量控制对检验结果的可靠性有至关重要的影响。临检中大多数不满意报告单均可溯源到样本质量不符合要求，因此有必要对影响血液样本的质量问题做一简要分析.

1 根据检验项目要求选用血液样本抗凝剂

目前，宠物实验室检验常用的血液样本抗凝剂有EDTA盐、肝素、枸橼酸盐和草酸盐等，实验室应根据不同试验项目，合理选用相应抗凝剂。下面就上述四种抗凝剂特点做一介绍：

1.1 四种抗凝剂的特性比较

乙二胺四乙酸（EDTA）盐：有二钾（EDTA－K2-H2O）、二钠（EDTA－Na2 -H2O）和三钾（EDTA－K3），临检血液样本通常采用国际血液学标准委员会推荐使用的EDTA-K2抗凝[1]，浓度为1.5-2.0mg/mL。EDTA-K2-H2O对红、白细胞形态影响很小，适用于多项血液学检查，尤其适用于全血细胞计数及血涂片形态学检查。因EDTA盐是通过与钙离子结合形成螯合物，而阻止血液凝固,故不适用于电解质、离子等生化项目的检验、凝血试验、血小板功能检查、输血及PCR试验等。

肝素是存在于所有哺乳类动物体内的天然抗凝剂，每毫升血液抗凝需要肝素15±2.5IU左右。肝素有抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）、灭活丝氨酸蛋白酶活性、阻止凝血酶形成、抑制血小板聚集等多种作用。因此常用于生化检查和血气分析的检测。另外，肝素具有保持红细胞的自然形态，是红细胞渗透脆性试验及血液粘度测定的理想抗凝剂。但由于可引起白细胞形态改变，因而不适用于白细胞计数和血液涂片。

枸橼酸盐主要通过与血液中钙离子形成络合物，而起抗凝作用。此抗凝剂适用于止血与血栓实验、血沉、输血等，不适用于血液生化检验。草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。其优点为溶解度大、抗凝作用强。缺点是使红胞缩小，故不适用于红细胞压积的测定及输血。

1.2 EDTA二钾和肝素抗凝血的实验对比

临检工作中有时会出现血液样本抗凝剂选择不恰当，导致检验结果异常的情况。为探讨EDTA二钾和肝素抗凝血液样本对血细胞涂片和生化测定结果的影响，笔者做了如下试验：

1.2.1 犬、猫外周血的血细胞涂片试验

选用健康犬、猫各一只，采取后肢隐静脉血液各0.5 mL，分别用EDTA－K2-H2O和肝素锂抗凝，在相同的条件下，同时制成2份血细胞涂片，用瑞氏-姬姆萨（瑞-姬）进行染色，结果如下：

犬EDTA－K2-H2O抗凝的血细胞涂片染色（见图1)：背景呈灰红色，细胞形态规则，胞核结构清晰，呈紫红色；中性粒细胞胞浆呈淡红色，含有许多淡紫红色小颗粒；红细胞周边着色较深，中央淡染；其染色效果与公认的血细胞涂片效果相同。

犬肝素抗凝血细胞涂片（见图2)：背景呈淡紫红色，细胞形态规则，核染色清晰，但中性粒细胞胞浆基本不着色，浆中有少量紫蓝色颗粒；淋巴细胞核、浆着色与EDTA抗凝血涂片着色基本相同；红细胞周边淡染，中央区域染成淡紫蓝色。猫EDTA－K2-H2O抗凝的血细胞涂片（见图3），染色情况同犬EDTA－K2-H2O血细胞涂片。猫肝素抗凝血细胞涂片（见图4）：细胞形态规则，中性粒细胞胞浆不着色，胞核结构清晰；红细胞着色较浅，呈淡紫色。

以上结果提示：采用肝素抗凝的犬、猫血细胞涂片，中性粒细胞胞浆均基本不着色，红细胞着色淡染区域及着色都与EDTAK2-H2O抗凝血的血细胞涂片有较大差异；证明肝素抗凝血不适用于血细胞涂片形态学检查。

1.2.2 犬、猫EDTA二钾与肝素抗凝血的钙离子测定比较

选用一只5岁健康巴哥犬和一只3岁健康家猫，采取后肢隐静脉血液各1mL，分别用EDTA－K2-H2O和肝素锂抗凝，离心后分离血浆。使用IDEXX 8008干式生化分析仪，进行钙离子检测。结果显示：使用肝素锂抗凝的犬、猫血浆样本钙离子测定的数值正常；而使用EDTA-K2-H2O抗凝的犬、猫血浆样本钙离子检测数值为零。试验证明EDTA-K2-H2O抗凝血不适用于钙离子等生化项目的检测，这可能与EDTA盐和钙离子结合形成螯合物的机理有关。

2 异常血样对生化检测的影响

溶血、脂血、黄疸等异常血样会对生化检测的结果产生诸多干扰。许多物质在红细胞内和在血清 (血浆) 内的含量不同。有文献报道：相当一些化学成分在红细胞和血清中的浓度分布有一定差异，当标本溶血后，红细胞中含量高的成分大量进入血清中......即使轻度溶血，也可使检测值明显升高[2]。众所周知：丙氨酸转氨酶（ALT）、总胆红素（TBIL）等在红细胞中的含量比血清(血浆)中的含量高数倍；而血钾（K）、谷草转氨酶(AST)等在红细胞中的含量比血清(血浆)中含量高出几十倍。因此，溶血的样本会造成血清(血浆)中TBIL、ALT、AST、K+等物质测定值假性增高。

脂血血清（血浆）样本外观呈乳白色，其中有乳糜微粒和极低密度脂蛋白悬浮颗粒，造成肉眼所见的云雾状和浑浊。黄疸血清（血浆）样本外观呈黄色，内含黄色化合物。血清（血浆）浑浊、黄疸会对一些以光学为基础的检验产生干扰 ,特别是对比浊试验、酶联免疫吸附测定（ELISA）等实验影响颇大。比浊试验和ELISA实验使用的仪器检测波长通常为340-630nm，脂血、黄疸血清（血浆）在这个波长范围有较大的吸光度，检测时会被仪器误认为是样品的吸光度，造成检测结果假性升高。血清（血浆）浑浊时可散射光线，对吸光度产生正向干扰，导致白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、总蛋白（TP）等测定结果偏高。血清（血浆）黄疸时，测定总胆红素TBil、直接胆红素DBil结果明显升高。

3 制备合格的血液样本

3.1 防止溶血的技巧：

采血后，应弃去针头，并沿管壁将血液缓慢注入试管，不可带针头加压注入；制备抗凝血时应严格按抗凝剂与血液的规定比例采血，混匀时避免强烈震荡；制备血清时应静置于室温或37℃恒温水浴，待血清自然析出，或以2000转/分离心，应避免高速离心造成溶血，并及时分离血清。

3.2 黄疸、脂血样本检测前的处理：

使用IDEXX 8008 生化分析仪时，可根据血液样本黄疸、脂血浑浊程度不同，做3-6倍稀释后检测。

3.3 血凝实验和血小板计数试验应选用一次性、疏水性塑料试管采血；

4 小结

4.1肝素抗凝血不适用于血细胞涂片检查，EDTA二钾抗凝血不适用于钙离子检测。应根据检验项目要求合理选用血液样本抗凝剂。

4.2 溶血、脂血、黄疸等异常血样会对生化检测的结果产生诸多干扰，应严格操作，杜绝血样人为溶血。遇到人为溶血血样时，实验室应与临床沟通重新留取血样。脂血、黄疸血样可根据其黄疸、脂血浑浊程度不同，做适当稀释后检测。血液样本检验前的质量控制，主要包括血液样本制备、处理等诸多环节，制备合格的血液样本，是做好分析前血液样本质量控制的关键。因此，我们必须从思想上重视，从制度上保证，并熟练掌握采血和制备合格血样的技术，认真做好试验前的质量控制，以使

检验质量全面提高。