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猪圆环病毒和大肠杆菌混合感染的诊断
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概述: 猪圆环病毒病是由猪圆环病毒引起的猪一种新的传染病,其临床诊断表现多种多样,会造成免疫力降低,主要特征为体质下降、腹泻及内脏器官等广泛病理变化[,特别是肾脏、脾脏及全身淋巴结高度肿大、出血和坏死等。猪大…
正文:

  猪圆环病毒病是由猪圆环病毒引起的猪一种新的传染病,其临床诊断表现多种多样,会造成免疫力降低,主要特征为体质下降、腹泻及内脏器官等广泛病理变化[,特别是肾脏、脾脏及全身淋巴结高度肿大、出血和坏死等。猪大肠杆菌病是由病源性大肠杆菌引起的仔猪肠道传染性疾病,以发生肠炎、肠毒血症为特征。1~7日龄仔猪发生的一种急性、高度致死性的肠道传染病,临床以灰白色稀便为主要特征,发病率高,死亡率低。该病一般发生于个别猪群,有时整群发病,以前多见于春秋季节,但现在的流行特点是没有明显的季节性。新生仔猪24 h内最易感染发病。一般出生后3 d左右发病,最迟不超过7 d。

  1、发病情况

  黑龙江省某猪场有200头猪,其中保育猪90头。2016年11月初该猪场部分保育猪突然体温升高至42 ℃,经流行病学调查得知该猪场发病率20%,死亡率3%,发病猪被毛凌乱,行动缓慢,皮肤苍白;表现为食欲废绝,呼吸急促,体温升高,消瘦;病猪也有咳嗽,黄疸,体表淋巴结肿大,贫血,逐渐消瘦衰竭死亡等临床症状。

  2、剖检变化

  病死猪耳根部、背部和股内侧皮肤有红色点状和片状红斑,部分猪腹下、臀部皮肤出现不规则隆起丘疹,呈现出紫色状。淋巴结呈化脓性病变,并且充血水肿;打开胸腔,见心包积液;肺表面肿胀坏死;胸膜炎、腹膜炎,心包膜内有大量炎性渗出物;肺呈弥散性、间质性肺炎变化;肾脏脾髓交界处出血,肾脏表面有出血点。肠道急性卡他性炎症,胃膨胀,胃底黏膜潮红;肠壁黏膜充血,水肿;肠腔有黄白色内容物。通过流行病学调查、临床症状和病理剖检变化初步怀疑为猪圆环病毒和大肠杆菌混合感染,需进一步通过实验室方法确诊。

  3、实验室诊断

  3.1 细菌学检测

  无菌采取病死猪的肝脏、肺脏接种于血琼脂培养基中,37 ℃培养24 h后挑取典型菌落接种于麦康凯培养基和伊红美蓝培养基37 ℃恒温培养24 h,观察菌落特征。结果为麦康凯培养基长出粉色,光滑,圆形菌落;在伊红美蓝培养基长出紫黑色,金属光泽菌落,对其进行革兰氏染色镜检,染为红色菌落,可见两端钝圆,短小杆状菌,革兰氏染色为阴性(如图4,图5和图6)。

  3.2 药敏试验

  在血平板上培养纯化的单菌落,贴药敏片于培养基进行37℃培养。结果表明该分离菌对畜炎宁、阿米卡星、头孢唑啉和头孢噻呋高度敏感;对强力霉素、庆大霉素和硫酸头孢喹肟中敏;对氟苯尼考、恩诺沙星和林可霉素耐药(表1)。

  3.3 生化鉴定

  分离纯化的菌进行生化试验,过氧化氢酶、糖类发酵、硫化氢和尿素酶等试验,结果能发酵糖类,产酸、产气、不产生H2S,不分解尿素,符合大肠杆菌生化特性(表2)。

  3.4 PCR检测

  按照 TIANamp Virus DNA/RNA Kit 病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取病毒的DNA和RNA,用猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、高致病性猪蓝耳病毒、圆环病毒和伪狂犬病毒的特异性引物进行PCR反应扩增。引物参照GenBank发表的基因序列设计并合成(见表3)。结果显示第4泳道在490 bp左右有一条带,与圆环病毒片段相符,见图7。综合诊断可以确诊该病例为猪圆环病毒和大肠杆菌混合感染。

  4、讨论

  黑龙江省大庆市某猪场送检的病猪通过实验室诊断确诊为猪圆环病毒和大肠杆菌混合感染。猪场曾接种相关疫苗,但抗体水平不足以抵抗病毒的侵袭,造成疫病流行,所以应制定合理的免疫程序,避免继发感染。随着集约化、规模化养猪业的发展,猪场的疾病情况更加复杂。猪圆环病毒病属于免疫抑制性疾病,一旦发病就会降低猪的免疫力,将给养猪场造成很大经济损失,因此猪场必须建立健全卫生防疫制度,严格监督执行。

  1)对病猪进行隔离,无害化处理,搞好环境卫生,疫苗接种等综合防治措施,避免病原入侵。及时治疗发病猪,防止传染给其他猪。对猪舍通道设备等全面消毒,每3天消毒1次,尽量做到清除环境中潜在病原微生物,保证消毒效果。环境净化,疫情严重威胁时,在多数猪场尚无多点生产体系情况下,育肥舍要单元式全进全出的管理,每个猪舍用具、人员等要独立,不可共用。2)制定合理的免疫保健程序,改善饲养管理,合理搭配日粮,改善空气质量,降低氨气和硫化氢的浓度,减少环境带来的应激,以及避免饲喂霉变饲料等,饲料要定期添加抗生素和维生素,增强机体的免疫力。3)制定免疫程序,合理制定计划,根据当地相应感染毒株进行疫苗注射,合理定期进行抗体情况的监测,保证猪群的健康水平;减少应激因素对仔猪的影响,病猪要进行对症治疗,选用黄芪多糖等。总之,防治猪场病毒和细菌性的混合感染最主要就是做好消毒措施,并且调节动物机体的免疫功能,通过多方面的渠道最终才能达到抵抗病毒的入侵。

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