九、禽流感的最新研究进展

禽流感的研究发展到20世纪90年代，已进入分子水平的高峰阶段。其共同的特点，就是对病毒的致病性研究有了新的突破。美国D.A. Serule等人用RT-PCR和循环测序技术，对6个H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)切割位点氨基酸序列进行了测定。结果表明，所有高致病性的H5、H7亚型AIV都有多个碱性氨基酸与HA切割位点相毗连B-X-B-R (B-碱性精氨酸或赖氨酸，X-非碱性氨基酸，R-精氨酸)是高致病力病毒最小基序。从分子水平研究禽流感病毒的致病力，尽管致病力是AI病毒的一个多基因特性，但也与其HA糖蛋白切割位点有多个碱性氨基酸相关。建议将病毒归纳于高致病的最小基序是B-X-B-R。病毒与质膜融合，活化HA病毒基因组进入细胞浆，启动感染。高致病性H5或H7亚型HA切割位点处有一系列碱性氨基酸，存在于大多数真核细胞中的细胞内枯草溶菌素样切蛋白酶，可促进HA的切割活化作用。而特异性细胞蛋白酶识别，切割不同病原型HA糖蛋白的能力决定病毒在宿主中的传播。由于宿主的大多数细胞均有内切蛋白酶，因此，HA切割作用范围广，进而导致严重病变和高死亡率。而非高致病力病毒HA切割位点只有一个碱性氨基酸(精氨酸)，该位点于呼吸道和肠。由此可见HA切割点碱性氨基酸序列能作为鉴定高致病力和潜在高致病力分离株的遗传标记。M. Perdu等人最近研究证明自然发生的非致病性禽流感病毒可以通过碱性氨基酸在血凝素蛋白切割位点的快速插入而获得高致病性的表现型，对上个世纪高致病性的禽流感毒株的综合调查显示，嘌呤三联体(密码子)自发复制是H5、H7亚型毒株在野外获毒力的重要机制。R.Slemons等最新研究表明，非感染性的AI病毒经细菌蛋白酶的激活，提高了禽流感在野外感染的严重性。他们从临床正常的鸡和火鸡的气管试子中分离到高蛋白水解酶细菌，6个高蛋白水解酶细菌之一Vibro Algi-nolyticus (VA)分泌一种蛋白酶，这种蛋白酶提高了两个禽流感毒株——火鸡/威斯康星/68和野鸭/俄亥俄/184/86的体外感染性。VA和火鸡/威斯康星/68毒对幼火鸡的共同感染使肺组织的病毒滴度大大提高。24h立即活体检查可见到VA对幼火鸡呼吸道的影响，细菌的攻击导致了早期气管上皮的损伤，这些组织损伤可能与幼火鸡肺组织的高滴度的混合感染有关。美国R.G. Webster等，最近用DNA基础疫苗免疫鸡防治H5、H7禽流感的试验表明，在H5重型流感病毒间DNA交叉保护性好，免疫前检不出抗体而攻毒免疫后迅速出现高滴度的抗体，表明活化B细胞是DNA介导免疫保护的主要机制。